超低分子量蛋白質(zhì)Marker(3.3-20.1kDa)-蛋白電泳/marker-蛋白與免疫
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超低分子量蛋白質(zhì)Marker(3.3-20.1kDa)| 英文名稱 | Protein Marker(3.3kD-20.1kD) |
|---|---|
| 儲(chǔ)存條件 | -20℃保存，有效期為一年。 |
| 單位 | 支 |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
本產(chǎn)品包含3種多肽和2種低分子量蛋白質(zhì)組成，分子量范圍為3. 3kD-20. 1kD。 可以用來(lái)判斷SDS-PAGE上多肽和小蛋白的分子量。本品為蛋白質(zhì)和多肽混合物的凍干粉，每種蛋白含量約為15-22.5μg，配有一支1×上樣緩沖液。
凝膠制備及染色注意事項(xiàng):
1. 先配制分離膠，聚合后再配制夾層膠，最后配制濃縮膠，3種膠的制膠體積比為4:1.5:1。電泳時(shí)，30v跑1-2小時(shí)后，待指示前沿到達(dá)分離膠上沿時(shí)，把電壓調(diào)至100v，至電泳結(jié)束，整個(gè)電泳過(guò)程大約需要6-8小時(shí)。
2. 由于多肽所含的氨基酸數(shù)目較少，因此如該多肽含有過(guò)多的極性氨基酸(堿性或酸性)，則會(huì)影響其在SDS-PAGE圖上的條帶遷移率，即其表觀分子量可能和多肽的氨基酸理論推算分子量有一定距離。
3. 由于SDS-PAGE的圖譜上，蛋白質(zhì)對(duì)數(shù)分子量和遷移率成正比直線關(guān)系的分子量范圍為15,000-200,000，因此對(duì)于分子量小于10000的蛋白質(zhì)或多肽的分子量，只能根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)分子量進(jìn)行估計(jì)，推斷其是否落入預(yù)測(cè)的分子量范圍。
4. 由于超低分子量多肽（3000及3000以下），極易從凝膠上浸出，因此染色及脫色時(shí)間不宜太長(zhǎng)，脫色后凝膠也不宜在水中浸泡保存過(guò)久，否則條帶會(huì)消失。
5. 電泳之后可將膠置于固定液中固定20分鐘，再進(jìn)行染色，能得到較好的蛋白條帶；如時(shí)間不允許，也可不進(jìn)行固定直接染色。如果使用配方7進(jìn)行染色時(shí)效果不好或考慮其毒性，請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍(lán)蛋白膠快速染色液(貨號(hào):P1300)，該產(chǎn)品具有染色快，無(wú)毒，靈敏性高等特點(diǎn)，是常規(guī)染色液的替代品。
相關(guān)產(chǎn)品：
P1015 4×蛋白上樣緩沖液（含DTT）
P1016 4×蛋白上樣緩沖液（含β-巰基乙醇）
A1030 10%過(guò)硫酸氨
T1070 5×Tris-甘氨酸電泳緩沖液
P1300 考馬斯亮藍(lán)快速染色
附:小分子蛋白質(zhì)SDS-PAGE電泳試劑配制
1. 49.5% T 3 % C (配制夾層膠和濃縮膠)
丙烯酰胺 48g
甲叉雙丙烯酰胺 1.5g
用ddH20溶解后定容至100mL
2. 49. 5% T 6 % C (配制分離膠)
丙烯酰胺 46. 5g
甲叉雙丙烯酰胺 3. 0g
用ddH20溶解后定容至100mL
3. 凝膠緩沖液
Tris堿182g
ddH20 300mL
用HCl調(diào)節(jié)pH值至8.45
用ddH20定容至 500mL
再加入SDS 1.5g
4 . 10×陽(yáng)極緩沖液(下槽緩沖液〕
Tris堿 121.1 g
ddH20 400mL
用HCl調(diào)pH值至8.9
用ddH20定容至 500mL
5. 陰極緩沖液(上槽緩沖液)
Tris堿12 .11g
Tricine17.92g
SDS1g
用ddH20定容至1000mL
此溶液不用調(diào)節(jié)pH值
6. 固定液
0.5% 戊二醛
30% 乙醇
用ddH20定容至100mL
7. 染色液
50% 甲醇
10% 乙酸
0.2% 考馬斯亮藍(lán)G-250
用ddH20定容至500mL
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