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海博生物鱟試劑一級(jí)代理授權(quán)代理

鱟試劑( Tachypleus Amebocyte Lysate , TAL )是海洋節(jié)肢動(dòng)物鱟血液中的阿米巴細(xì)胞( Amebocyte )經(jīng)裂解液或機(jī)械方法裂解細(xì)胞后提取得到的一種細(xì)胞溶解物。鱟試劑中含有特異性的凝固酶,在一定條件下可被極微量的內(nèi)毒素激活,當(dāng)凝固蛋白原的精氨酸18-蘇氨酸19和精氨酸46-甘氨酸47之間的肽鍵被切斷后,則游離出含有28個(gè)氨基酸的C肽片段和凝固蛋白分子兩端的A肽和B肽片段,并通過(guò)二硫鍵聯(lián)結(jié)聚合成凝膠,其形成凝膠的速度和堅(jiān)固程度與鱟試劑中凝固酶含量及內(nèi)毒素濃度成正比。根據(jù)鱟試劑的這一特殊性質(zhì),可以方便、敏感地快速定性或定量檢測(cè)檢品中的內(nèi)毒素含量。

鱟阿米巴細(xì)胞溶解物

若干ml

20mmol/L氯化鈣溶液

若干ml

154mmol/L氯化鈉溶液

若干ml

  1. 采血:新鮮健康成年的中國(guó)鱟(Tachypleus tri-denatus Leach),頭胸-腹關(guān)節(jié)處以碘酒、酒精(70%)常規(guī)消毒,用16號(hào)獸用針頭或特制玻管行心臟穿刺,使鱟血流入盛有抗凝劑(20mmol/L茶堿或25mmol/L乙二胺四乙酸鈉, ED-TA比例為1:1(v/v)的無(wú)熱原收集瓶中;

  2. 離心和洗滌:采血后立即離心,600g,5分鐘,棄藍(lán)色上清，見(jiàn)白色粉末狀沉淀,加3.1%NaCI洗滌、離心兩次,600g,5分鐘,再次洗滌后進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù);

  3. 裂解:將5×104/mm3細(xì)胞懸液100ml沉淀后,其壓積細(xì)胞加入10ml裂解液(154mmol/L NaCl ,50mmol/L Tris-HCI pH7.1±0.3,10~100mmol/L CaCl2),用力振蕩后置4℃冰箱見(jiàn)24~72小時(shí),取出2000g離心,15分鐘,所得上清即為粗制鱟試劑;

  4. 精制:氯仿抽提后加20mmol/L氯化鈣和154mmol/L氯化鈉鹽析,作敏感度檢測(cè)后分裝凍干保存。