人妻一区二区中文字幕在线-大肉棒抽插小嫩穴视频免费-国产福利萌白酱视频资源福利-最新国产主播一区二区-伊人五月天婷婷成人-色av中文字幕在线-美女打开小穴让男生操的视频-国产又长又粗又长又爽毛片-人人妻人人澡人人爽欧美三区

品牌: biomedworld 公司: 沃登醫(yī)學(xué)

提供商： 沃登醫(yī)學(xué) 服務(wù)名稱： 細(xì)胞elispot檢測

產(chǎn)品詳情請聯(lián)系金山科研平臺微信：jinshanbio
細(xì)胞elispot檢測一、服務(wù)介紹 隨著酶聯(lián)免疫分析技術(shù)在醫(yī)學(xué)及生物學(xué)領(lǐng)域的廣泛應(yīng)用，使體外檢測各種細(xì)胞因子及抗體研究有了新的突破。在研究免疫應(yīng)答機(jī)制時以往常用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測體液中游離的細(xì)胞因子（CK）或抗體。但由于游離的循環(huán)抗體或CK的半衰期不同，使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合，而不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。上世紀(jì)80年代，國外的科研工作者根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理，建立了體外檢測特異性抗體分泌細(xì)胞和CK分泌細(xì)胞的固相酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)技術(shù)。 本公司利用特異單克隆抗體捕獲細(xì)胞受到刺激后局部產(chǎn)生細(xì)胞因子。細(xì)胞分解后， 被捕獲的細(xì)胞因子與生物素標(biāo)記的二抗結(jié)合，其后再與堿性磷酸酶標(biāo)記的親和素結(jié)合。BCIP/NBT底物孵育后，PVDF孔板出現(xiàn)“紫色”的斑點(diǎn)表明細(xì)胞產(chǎn)生了細(xì)胞因子，通過ELISPOT酶聯(lián)斑點(diǎn)分析系統(tǒng)對斑點(diǎn)的分析后得出結(jié)果。二、服務(wù)內(nèi)容1．培養(yǎng)板的預(yù)處理：在24孔培養(yǎng)板內(nèi)加0.5ml 0.2%戊二醛，37℃，4h，棄掉板中的處理液，用PBS洗滌3次，每次3min；2．抗原包被：將適量抗原溶于包被緩沖液中，每孔加入0.5ml，4℃過夜，PBS-T洗滌3次，每次3min；3．制備細(xì)胞懸液：將待測已致敏小鼠處死，取出脾臟，置于加有Hanks液的小平皿內(nèi)，用鈍頭直角9號注射器針頭破少許脾被膜后，趕出細(xì)胞，用毛細(xì)吸管輕輕吹散細(xì)胞團(tuán)后，將懸液通過250目尼龍網(wǎng)，取濾液，1000r/min離心5min，Hanks液洗滌3次，計數(shù)細(xì)胞后，用1640液重新懸浮細(xì)胞，配成所需濃度；4．往各孔中加入0.5ml含不同濃度（104-106/ml）的細(xì)胞懸液，置37℃，5％CO2條件下孵育2-4h，棄掉培養(yǎng)液，PBS-T洗滌3次，每次3min；5．往各孔中加入0.5ml生物素化抗體（Bio-Ab）（2μg/ml），37℃孵育1h或4℃過夜，棄掉液體，PBS-T洗滌3次，每次3min；6．加入辣根過氧化物酶結(jié)合的親合素（Avi-HRP）（2μg/ml），37℃孵育30min，棄掉液體，PBS-T洗滌3次，每次3min；7．配制明膠-底物液：在37℃水浴中，將2.5mlTMB溶液（4mg/ml甲醇溶液）滴加入7.5ml10%明膠溶液（用pH5.0磷酸鈉-檸檬酸緩沖液配制）邊加邊攪，溶液呈白色，加入14μl 3% H₂0₂；8．顯色與計數(shù)：將培養(yǎng)板底冰浴，每孔加入0.6ml明膠-底物液，約3min，混合液凝固，將培養(yǎng)板取出，置室溫5min，將板倒置，用肉眼和低倍放大鏡計數(shù)所顯示出的顏色斑點(diǎn)。ELISPOT檢測試劑盒三、服務(wù)說明1.客戶提供：待檢測細(xì)胞等相關(guān)實(shí)驗用品（如需公司提供請說明）；2. 實(shí)驗周期：1周；3. 若另有疑問歡迎向本公司咨詢，我們將竭誠為您服務(wù)。四、質(zhì)量承諾1，權(quán)威完整的ELISPOT檢測報告；2. 真實(shí)的原始實(shí)驗數(shù)據(jù)；3. 詳細(xì)的實(shí)驗步驟。