JM109感受態(tài)細胞-重組克隆表達-分子生物學
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| 英文名稱 | E.coli JM109 Competent Cells |
|---|---|
| 儲存條件 | -70℃保存，必須加干冰運輸。自收貨之日起液氮保存至少一年，-70℃保存至少6個月。 |
| 外觀（性狀） | 干冰運輸，單加10kg干冰費 |
| 單位 | 袋 |
本公司生產的JM109感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌JM109菌株經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存幾個月轉化效率不發(fā)生改變。 基因型：recA supE44 endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] 特 點：一種琥珀抑制型F’重組缺陷菌株。支持M13噬菌體載體的生長，對轉染的DNA有修飾作用，但無限制作用。該菌株中的F’帶有l(wèi)acZΔM15，后者使得與在λZAP中編碼的β-半乳糖 苷酶氨基端進行α-互補，可用于藍白斑篩選。 操作方法：（以下各步驟均為無菌操作） 1、將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態(tài)細胞為例。 2、向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。 3、將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離心管。 4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養(yǎng)基，37℃ 180rpm振蕩培養(yǎng)1小時。目的是使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。 5、取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。涂布用量可根據具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul左右轉化產物涂板；反之，如果轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少可以將剩下的菌液再涂布新的平板。 注意事項： 1、收到感受態(tài)細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。 2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。 3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。 4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量 5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失將到最低。
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