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品牌: biomics 公司: 百奧邁科生物技術有限公司

提供商： Biomics Biotech 服務名稱： 實時熒光定量PCR技術服務（普通基因，siRNA,microRNA ） 規(guī)格： 180元/樣

規(guī)格： 產(chǎn)品價格： ￥180.0 規(guī)格： 180元/樣 產(chǎn)品價格： ￥180.0 產(chǎn)品詳情請聯(lián)系金山科研平臺微信：jinshanbio

實時熒光定量PCR（Real Time PCR，qRT-PCR）避免了傳統(tǒng)PCR 以終產(chǎn)物檢測定量產(chǎn)生的偏差，提高實驗的重復性。與常規(guī)PCR 相比，實時熒光定量PCR 具有特異性更強、有效解決PCR 污染問題、自動化程度高等特點，已成為國際公認的核酸分子定量的標準方法。該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA 表達量的變化；比較不同組織的mRNA 表達差異；驗證基因芯片，siRNA 干擾的實驗結果。它涉及到DNA或RNA 樣品制備，反轉(zhuǎn)錄及PCR 反應等一系列重要的分子生物學過程。

配套產(chǎn)品：qPCR實時熒光定量一步法試劑盒BK2100BK BK2100

設計目的片段和內(nèi)參基因的qPCR引物：利用Primer5.0等軟件設計PCR引物及探針。我們公司免費為客戶設計引物和探針。

SYBR Green 法1）建立以下反應體系試劑（SYBR Green法）量總RNA 根據(jù)實驗qPCR mix（包含MLV、Hot-start Taq、dNTP等 ） 終濃度為1×SYBR Green I solution 終濃度為1×上游引物，10μM 終濃度：~200 nM下游引物，10μM 終濃度：~200 nMMgCl2 根據(jù)實驗RNase-Free H2O To 25.0 μl

2） PCR 反應條件如下：步驟 循環(huán)數(shù) 步驟溫度 時間逆轉(zhuǎn)錄 1 1 42 oC 30 min失活MLV，激活Taq 1 1 95 oC 10 min1 95 oC 15 sec2 X oC* 實時熒光定量PCR 40 30 sec3 72 oC 30 sec*與引物的Tm 相關3） 取5μl PCR 產(chǎn)物跑1.5%瓊脂糖凝膠電泳，或做溶解曲線，檢測PCR 產(chǎn)物的特異

熒光圖譜

Taqman 法1） 建立以下反應體系試劑（Taqman法） 量總RNA 根據(jù)實驗qPCR mix（包含MLV，Hot-start Taq、dNTP等 ）終濃度為1×Taqman Probe 根據(jù)實驗上游引物，10μM 終濃度：~200 nM下游引物，10μM 終濃度：~200 nMMgCl2 根據(jù)實驗RNase-Free H2O To 25.0 μl

2） PCR 反應條件如下：步驟 循環(huán)數(shù) 步驟溫度 時間逆轉(zhuǎn)錄 1 1 42 oC 30 min失活MLV，激活Taq 1 1 95 oC 10 min1 95 oC 15 sec實時熒光定量PCR 402 60 oC* 1 min3實驗完畢之后，將數(shù)據(jù)導入到Excel 中進行數(shù)據(jù)分析。4.結果分析：利用ΔΔCt 法，相對定量，將目的基因的表達與看家基因的表達對比，獲得沉默效果。