WestPicoECL超敏發(fā)光液-WesternBlot-蛋白與免疫
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West Pico ECL超敏發(fā)光液| 有效期 | 1年 |
|---|---|
| 英文名稱 | West Pico ECL Substrate |
| 儲存條件 | 2-8℃ |
| 純度 | ＞99% |
West Pico ECL超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由于采用了獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Pico ECl超敏發(fā)光液是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑： (1) 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作;
產(chǎn)品說明：
West Pico 超敏發(fā)光液用于檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。用于HRP標(biāo)記抗體的Western Blot和HRP標(biāo)記探針的核酸雜交。由于采用了獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)，West Pico超敏發(fā)光液是目前最靈敏的商業(yè)化熒光ECL檢測試劑：
具有極高靈敏度和高信噪比；可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作；發(fā)光迅速，熒光可使X光膠片感光達(dá)12小時以上，特別適用于痕量蛋白或核酸檢測；可使用更高的抗體稀釋倍數(shù)(1:2000～1:10000)，極其節(jié)省抗體。
使用方法:
1. 執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)膜和Western Blot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗–鏈親和素–生物素-HRP夾法。
2.Western Blot最后一次洗膜的同時新鮮配制發(fā)光工作液：分別取等體積的溶液A和B，放入干凈容器中混合。建議立即使用工作液，室溫放置數(shù)小時后仍可使用但靈敏度略有降低。
3. 用鑷子取出膜，搭在濾紙上瀝干洗液但勿使膜完全干燥。將膜完全浸入發(fā)光工作液(0.125mL發(fā)光工作液/cm2膜)中，與發(fā)光工作液充分接觸。室溫孵育3分鐘，準(zhǔn)備立即壓片曝光。孵育時間過長不會增加靈敏度，有時還會導(dǎo)致曝光條帶異常。發(fā)光過程的本質(zhì)是酶促反應(yīng)，使用過少的發(fā)光工作液不利反應(yīng)進(jìn)行，也會導(dǎo)致膜上條帶曝光不均和明顯降低靈敏度。為達(dá)節(jié)約目的可將膜剪小但勿降低發(fā)光液用量。
4. 用鑷子夾起膜，搭在濾紙上瀝干發(fā)光工作液。但勿洗去發(fā)光液。
5. 打開X光膠片暗盒，在暗盒內(nèi)表面鋪一張面積大于膜的保鮮膜。將Western Blot膜貼在保鮮膜上，將保鮮膜折起來完全包裹Western Blot膜，去除氣泡和皺褶，可剪去邊緣部多余的保鮮膜。用濾紙吸去多余的發(fā)光工作液。用膠帶將覆蓋Western Blot膜的保鮮膜固定在暗盒內(nèi)，蛋白帶面向上。
6. 暗房內(nèi)壓X光膠片，分別曝光不同的時間如數(shù)秒到數(shù)分鐘。顯影沖洗。
注意事項：
1. 步驟1～5可在日光燈下操作;但發(fā)光液曝露于強(qiáng)光下時間過久靈敏度可能略有降低，移到暗房操作可避免之。戴手套可以避免在膜上留下手印。
2. 長時間曝光或蛋白過量，將加深背景并使條帶強(qiáng)弱變化失去線性關(guān)系。曝光不足則條帶模糊。
3. 發(fā)光工作液孵育約3分鐘后膜上的條帶發(fā)光。強(qiáng)條帶發(fā)光在暗房中肉眼可見，低豐度蛋白條帶發(fā)光較弱甚至肉眼不可見但可使X光膠片曝光。不能簡單以肉眼觀察判斷條帶發(fā)光時間。肉眼不可見的熒光實(shí)際上可持續(xù)數(shù)小時并使X光膠片感光，因而弱帶可曝光1-10小時。如果曝光后條帶不佳，可用洗膜緩沖液洗膜，重新孵育二抗，然后重新用ECL發(fā)光和曝光。
4. 由于超敏發(fā)光液極其靈敏，強(qiáng)烈推薦大多數(shù)進(jìn)口抗體起始濃度為一抗1:1000～1:4000，二抗1:2000～1:5000。抗體濃度過高將造成高背景或沒有條帶，導(dǎo)致失敗。
5. 某些保鮮膜包裹印跡膜時可能會淬滅熒光，應(yīng)選擇高質(zhì)量保鮮膜。
6. 使用肉眼可見的預(yù)染色蛋白Marker和熒光–放射自顯影曝光標(biāo)簽可精確確定膠片上條帶的位置和大小。
7.NaN3能抑制HRP活性，回收第二抗體應(yīng)避免使用NaN3，如必需使用勿超過0.01%。
備注：產(chǎn)品信息可能會有優(yōu)化升級。請以實(shí)際標(biāo)簽信息為準(zhǔn)。
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