普通RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)-蛋白提取/定量-蛋白與免疫
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普通RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)| 別名 | 蛋白提取試劑盒 |
|---|---|
| 英文名稱 | RIPA buffer |
| 儲(chǔ)存條件 | RIPA裂解液4℃保存，PMSF-20 ℃保存。至少1年 |
| 單位 | 瓶 |
普通RIPA裂解液(組織/細(xì)胞)產(chǎn)品配有一支PMSF（100mM，1.5ml）
產(chǎn)品簡(jiǎn)介：RIPA 組織/細(xì)胞裂解液是利用表面活性劑等來(lái)裂解細(xì)胞膜（包括核膜）。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。
使用說(shuō)明 ：
如發(fā)現(xiàn)RIPA有沉淀，請(qǐng)放室溫半小時(shí)或者常溫水浴使沉淀溶解。
根據(jù)使用量，取每1ml RIPA 加入10ul PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM，混勻備用 （PMSF現(xiàn)用現(xiàn)加）。
1、樣品前處理：
a)對(duì)于貼壁細(xì)胞：去除培養(yǎng)液，用 PBS、生理鹽水或無(wú)血清培養(yǎng)液洗一遍。按照 6 孔板每孔細(xì)胞量加入150-250 ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數(shù)下，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。
b)對(duì)于懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，按照6孔板每孔細(xì)胞量加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細(xì)胞以充分裂解。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)胞沉淀。如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 5-10×105細(xì)胞/管，然后再裂解。
c)對(duì)于組織樣品：把組織剪切成細(xì)小的碎片。按照每20mg組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液
(如果裂解不充分可以適當(dāng)添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量) 。
用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。
2、后處理：
將裂解后的樣品10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進(jìn)行后續(xù)的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
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