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胞漿蛋白提取試劑盒-蛋白提取/定量-蛋白與免疫

2023-10-29

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胞漿蛋白提取試劑盒

儲(chǔ)存條件-20℃
單位

胞漿蛋白提取試劑盒用于哺乳動(dòng)物組織和細(xì)胞中提取胞質(zhì)蛋白,試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑,作用較為溫和,可獲得蛋白,可用于免疫印跡實(shí)驗(yàn)等基礎(chǔ)研究實(shí)驗(yàn),由于含有上述的酶抑制劑,不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產(chǎn)品組成:

規(guī)格

儲(chǔ)存條件

裂解液

100 ml

2-8 oC

磷酸酶抑制劑(100x)

1ml

-20 oC

蛋白酶抑制劑(100x)

1 ml

PMSF(100x)

1ml

操作方法: 1、組織總蛋白的提取 在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF;混勻,放置在冰上備用; 稱取0.1g的新鮮組織,放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處,用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎,然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液,研磨直至沒(méi)有明顯的組織塊,這個(gè)過(guò)程注意冰上操作; 將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中,4 oC 12000g離心30min; 吸取上清至新的管中; 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 (提取好的蛋白建議保存于-80 oC,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。) 2、細(xì)胞總蛋白的提取 裂解液的用量:107個(gè)細(xì)胞需要裂解液1ml; 貼壁細(xì)胞:棄去培養(yǎng)基,用冷的PBS洗兩次,棄去PBS,然后加入計(jì)算好的細(xì)胞裂解液;在冰上用細(xì)胞刮刀進(jìn)行刮離細(xì)胞, 將刮離的細(xì)胞裂解液移入EP管中,顛倒裂解20-30min 懸浮細(xì)胞:4 oC 400g離心收集細(xì)胞,用冷的PBS洗兩次細(xì)胞,同樣按細(xì)胞數(shù)加入裂解液, 渦旋10s,放置冰上裂解10min,重復(fù)3-4次; 裂解完畢之后,將細(xì)胞裂解液4 oC 12000g離心30min; 將上清移入新的EP管中; 進(jìn)行蛋白定量或者變性進(jìn)行蛋白實(shí)驗(yàn)。 (提取好的蛋白建議保存于-80 oC,即用即取,避免反復(fù)凍融,避免長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存。)

注意事項(xiàng): 實(shí)驗(yàn)過(guò)程,所有試劑都要需要預(yù)冷或者即融,保證操作過(guò)程中的低溫環(huán)境; PSMF(有毒)現(xiàn)用現(xiàn)加,因?yàn)镻MSF在水溶液中會(huì)快速降解;

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