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熒光蛋白上樣緩沖液在電泳前的樣品處理階段對(duì)SDS-PAGE的蛋白樣品進(jìn)行預(yù)染，標(biāo)記上熒光。實(shí)驗(yàn)完成以后，凝膠中或轉(zhuǎn)膜后的蛋白條可直接通過紫外燈、LED燈或其他數(shù)字成像系統(tǒng)進(jìn)行觀察和分析，無需染色脫色。 熒光蛋白上樣緩沖液靈敏度高比銀染高。穩(wěn)定性強(qiáng)，背景低。可對(duì)所有蛋白進(jìn)行染色，不影響蛋白的遷移率與電泳圖譜。電泳過程中，游離的染料分子與溴酚藍(lán)的遷移速率一致，跑膠結(jié)束時(shí) 移至凝膠末端，背景干凈。熒光蛋白上樣緩沖液非常適合用于追蹤蛋白表達(dá)純化以及Western blot的SDS-PAGE。 使用步驟 1. 請(qǐng)?jiān)谑褂们案鶕?jù)管壁標(biāo)簽上的體積加入resuspension buffer重懸。Resuspension buffer在4℃可能會(huì)有沉淀產(chǎn)生，室溫下放置至沉淀消失。 2. 將用上樣緩沖液處理的蛋白樣品與待電泳蛋白樣品1:2混合。比如，3ul 上樣緩沖液 + 6ul 蛋白樣品。 3. 90-100℃加熱上述處理的樣品混合液5分鐘。細(xì)胞或組織樣品，加熱時(shí)間延長至10分鐘。確保加熱溫度>90℃使樣品充分受熱。 ? 大部分預(yù)制膠（Bis-Tris體系除外）可以直接進(jìn)行下一步。Bis-Tris體系的預(yù)制膠(如Life Technology)，需加入20%已處理樣品體積的Enhancing buffer。比如，10ul已處理的樣品需加入2ul Enhancing buffer。 4. 樣品可以上樣進(jìn)行電泳了（無需再加Loading Buffer處理）。 5. 電泳結(jié)束后，將凝膠放至透射儀上進(jìn)行觀察和拍照。透射儀可以是紫外燈，藍(lán)光LED燈或其它凝膠成像系統(tǒng)。如果光源在可見光波長范疇的無需剝膠，因?yàn)榭梢姴ㄩL范圍內(nèi)的光可以穿透玻璃或塑料材質(zhì)的膠板。 6. （可選的）如果有需要，經(jīng)熒光蛋白上樣緩沖液處理的凝膠仍可進(jìn)行考染。按標(biāo)準(zhǔn)的考染步驟進(jìn)行即可。 注意事項(xiàng)： 1. 請(qǐng)勿使用該上樣緩沖液處理預(yù)染的或預(yù)處理的蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)。這些產(chǎn)品與熒光蛋白上樣緩沖液不兼容。 2. 靈敏度影響因素：高pH（大于7）不會(huì)影響染色，低pH則會(huì)降低染色的效率，如果樣品的pH低于5，建議將pH調(diào)整至7以上。 3. 熒光蛋白上樣緩沖液不適合在如下SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)中使用：切割蛋白條帶用以測(cè)序、質(zhì)譜分析或抗體制備。

4. 建議-20保存，如果室溫放置2-3周，則可添加新的DTT，蛋白條帶會(huì)重新變得清晰和明亮。添加DTT的終濃度不要超過20 mM。也可以添加其他還原劑TCEP(2 mM)， 效果也很好。

規(guī)格：每個(gè)規(guī)格包含3管：Instant-Bands, Resuspension Buffer 和Enhancing buffer。只有使用Bis-tris 膠時(shí)才需要加Enhancing Buffer.

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