低熔點(diǎn)瓊脂糖-核酸電泳/marker-分子生物學(xué)
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| 有效期 | 4年 |
|---|---|
| 級別 | Biotech Grade |
| 英文名稱 | Agarose(Low melting gel) |
| CAS | 9012-36-6 |
| 儲存條件 | RT |
| 外觀（性狀） | 粉末 |
| 單位 | 瓶 |
正確的加熱方式對瓊脂糖的充分溶解和凝結(jié)至關(guān)重要，在此，我們提供以下幾點(diǎn)作為正確制備瓊脂糖凝膠的操作參考。 1.瓊脂糖加熱溶解所需時(shí)間短。
2.瓊脂糖在TAE或者TBE緩沖液中不溶解，加熱時(shí)，瓊脂糖顆粒水化形成溶液，水化是時(shí)間依賴的，不同的瓊脂糖水化點(diǎn)不同。瓊脂糖純度高，超微顆粒，非常適合作為電泳實(shí)驗(yàn)載體。對比于其他的瓊脂糖，瓊脂糖水化速度快，使用者無需煮沸過長時(shí)間，否則易導(dǎo)致膠液濃稠，不利于混勻，凝膠后易破損。
3.熔點(diǎn)范圍：62-68℃ ,凝膠溫度 ( 1.0%)：24-29℃
瓊脂糖凝膠制備 用1×TBE溶液配制1%濃度瓊脂糖凝膠 1.用于制備膠液的錐形瓶體積應(yīng)為膠液體積的2-4倍，緩慢向緩沖液中加入瓊脂糖，邊加邊攪拌，防止瓊脂糖聚集。記錄瓶體和溶液總重量。 2.微波爐高火加熱30s，根據(jù)配制的溶液體積調(diào)整加熱時(shí)間。加熱時(shí)間與微波爐、瓶體大小和瓊脂糖濃度有關(guān)。 3.搖勻瓊脂糖溶液。 4.再次高火加熱30s，搖勻瓊脂糖溶液。 5.將溶液再次放回微波爐，高火加熱至沸騰（大約10-35s）。接觸移動時(shí)瓊脂糖膠液可能會劇烈沸騰，小心操作，避免燙傷。從微波爐拿出后，室溫冷卻1-2min，輕輕搖晃使液體里的氣泡溢出。 6.重新放回微波爐，高火加熱，使之沸騰約15s，觀察瓊脂糖的溶解狀態(tài)，如果仍有顆粒存在，重復(fù)該步驟直至所有晶體全部溶解。 7.待瓊脂糖完全溶解成液體，重新稱量總重量，計(jì)算蒸發(fā)液體量，用水補(bǔ)齊至原始重量，搖勻液體。 8.建議膠液冷卻至50-55℃時(shí)灌膠，有利于凝膠孔徑均勻一致，不至于損傷制膠儀。灌膠前輕輕搖晃瓊脂糖溶液，釋放膠液中殘存的氣泡。 9.向制膠槽中灌膠，一般膠的厚度3-5mm，灌膠后盡量排除梳孔之間或底部的氣泡。 10.在室溫放置（30-45min）使膠充分凝結(jié)。 如果要制備不同濃度和不同體積的凝膠，請注意以下兩點(diǎn)： 1.在凝膠溶液煮沸前至少進(jìn)行2次搖勻。 2.膠液沸騰后，每隔10-15s觀察一次膠液溶解程度（間隔時(shí)間取決于膠液濃度和體積）。
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