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產(chǎn)品簡(jiǎn)介： 本試劑是一種通用的總RNA提取試劑，適用于動(dòng)植物細(xì)胞或組織及細(xì)菌的總RNA抽提，可有效防止RNA在提取過程中的降解。獲得的RNA可直接用于Northern雜交，純化mRNA，體外翻譯，RNase保護(hù)實(shí)驗(yàn)，RT-PCR以及cDNA克隆等一系列操作。該試劑可用于100次總RNA提取（10平方厘米細(xì)胞或100mg組織）。 操作說明: 自備新開封或?qū)Ｓ寐确拢惐迹?5%乙醇，DEPC處理水。 1. 細(xì)胞裂解或組織勻漿： 1)貼壁細(xì)胞：吸盡培養(yǎng)液，每10平方厘米（6孔板孔或35 mm平皿）細(xì)胞加入1 ml TriQuick Reagent,使其覆蓋培養(yǎng)細(xì)胞，再用吸管或加樣器吹打2~3次，細(xì)胞應(yīng)完全裂解，然后轉(zhuǎn)移至離心管中。 2)懸浮細(xì)胞：離心收集細(xì)胞，吸盡液體，每五百萬至一千萬（5×106-1×107）動(dòng)植物或酵母細(xì)胞，或一千萬 (1×107)細(xì)菌，加入1ml TriQuick Reagent 。用吸管或加樣器吹打，使其完全裂解。某些酵母和細(xì)菌如裂解不充分，可用勻漿器勻漿，以確保其完全裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中。 3)組織：先將組織剪切成小塊，放入玻璃勻漿器內(nèi)。冷凍組織可在研缽中研磨勻漿。每50-100mg組織加入1ml TriQuick Reagent ，勻漿至完全裂解。轉(zhuǎn)移至離心管中。 裂解產(chǎn)物應(yīng)呈澄清的透明粘稠液體。室溫放置5分鐘。對(duì)于多糖、蛋白等雜質(zhì)豐富的組織樣品，勻漿后仍會(huì)存留有不溶物質(zhì)，可12000g 4℃離心10分鐘，然后吸取上清至一新的離心管中。 2. 分離：在裝有裂解物的離心管中加入0.2倍體積的氯仿（1 ml TriQuick Reagent 加入0.2 ml氯仿），振蕩器上充分振蕩混勻30秒，室溫放置2-3分鐘。12000g 4℃離心10分鐘，然后吸取含總RNA的上層水相至一新的離心管中，每毫升TriQuick Reagent 約可吸取0.5-0.6 ml。有機(jī)相和中間層含有DNA和蛋白質(zhì)，應(yīng)避免觸及。 3. 沉淀：按每毫升TriQuick Reagent 加入0.5 ml異丙醇，顛倒數(shù)次混勻，室溫沉淀10分鐘。12000g 4℃離心10分鐘，在管底可見RNA沉淀。棄上清，按每毫升TriQuick Reagent 加入1 ml 75%乙醇，輕輕顛倒混勻，以清洗RNA沉淀。12000g 4℃離心2分鐘，棄去液體，小心勿丟棄RNA沉淀。室溫倒置晾干5~10分鐘。 4. 溶解：加入適量DEPC處理水使RNA沉淀溶解。存放于-80℃。 注意事項(xiàng)： 1，RNA提取過程中所用器皿、離心管、吸頭等應(yīng)保證無污染無RNA酶。操作中應(yīng)小心，防止外源性RNA酶污染樣品導(dǎo)致RNA樣品降解。 2，試劑中含有酚等有害物質(zhì)，注意個(gè)人防護(hù)。

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