小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)——12凍存、復(fù)蘇小鼠未受精卵
平臺授權(quán)一級代理，咨詢微信：jinshanbio
小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)——12凍存、復(fù)蘇小鼠未受精卵回到小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)指南目錄
回到小鼠生殖工程凍存及培養(yǎng)試劑
◆材料
１. 過量排卵處理的雌性小鼠２. 培養(yǎng)皿（corning 35mm X 10mm Cat.No.430588）３. 流動石蠟（NacalaiTesque Cat.No.26137-85）４. 自動移液器（GILSON PIPETMAN P-20）５. 黃色槍頭（BM器材 Cat.No.110-96R）６. mTHF７. 1%透明質(zhì)酸酶溶液８. 胎牛血清（Gibco Fetal Bovine Serum(FBS) Cat.No.26140-087）９. 一次性過濾裝置（微孔孔徑：0.22μm Cat.No.SLGVJ13SL）10. 2.5mL注射器（泰爾茂Cat. No.SS-02SZ）11. 微管12. CO2培養(yǎng)箱（37°C 5% CO2 95% air）13. 可使用便捷玻璃化方法凍存和復(fù)蘇胚胎時使用的相同器材和培養(yǎng)基。
（用mHTF清洗復(fù)蘇后的未受精卵）
◆步驟
培養(yǎng)皿的準(zhǔn)備
1. 制作采集卵子用的培養(yǎng)皿（1個200μL的mHTF滴液），靜置在培養(yǎng)箱內(nèi)30分鐘。
２. 制作清洗卵子用的培養(yǎng)皿（4個80μL的mHTF滴液），靜置在培養(yǎng)箱內(nèi)30分鐘。
３、 適量制作含2０％FBS的mHTF溶液并進(jìn)行過濾滅菌，然后制作處理FBS用的培養(yǎng)皿（2個100μL含20%FBS的mHTF滴液），靜置在培養(yǎng)箱里30分鐘以上。
去除卵丘細(xì)胞
1. 從過量排卵的雌性小鼠里取出的卵子塊放進(jìn)采集卵子用培養(yǎng)皿上200μL 的mHTF滴液里。（一個滴液可容納
5只小鼠的卵子塊）。
要點：從小鼠安樂死至采集輸卵管并將采集的卵子塊導(dǎo)入mHTF滴液的這一過程操作要在極短時間內(nèi)完成（30秒內(nèi)）
要點：1個人做實驗時，不要一次性讓多只小鼠安樂死，應(yīng)該一只只地進(jìn)行，并迅速采集卵子。
２. 用自動移液器（P-20）將20μL 的1%透明質(zhì)酸酶溶液添加進(jìn)含有卵子塊的200μL滴液里，靜置在37°C的培養(yǎng)箱里1分鐘。
３. 把去除卵丘細(xì)胞的卵子按順序轉(zhuǎn)移至80μL的mHTF滴液里（清洗卵子用的培養(yǎng)皿）。
要點：在37°C下清洗一分鐘后，即使不能完全去除卵丘細(xì)胞，清洗的過程中卵丘細(xì)胞也會漸漸剝離。
４. 在卵子清洗用培養(yǎng)皿的mHTF滴液里清洗去除卵丘細(xì)胞的卵子3次。
胎牛血清的處理（FBS）
１. 將未受精卵移至含20%FBS的mHTF的滴液（處理FBS用的培養(yǎng)皿）里，清洗2次，并培養(yǎng)10分鐘。 ＊FBS有利于凍存和復(fù)蘇過程中引起的未受精卵的透明帶硬化。
未受精卵的凍存
１. 去除卵丘細(xì)胞的未受精卵在含F(xiàn)BS的培養(yǎng)基里培養(yǎng)后，凍存和復(fù)蘇操作與胚胎的步驟相同。
（用mHTF清洗復(fù)蘇后的凍存精子）
用凍存、復(fù)蘇后的未受精卵子進(jìn)行體外受精
1. 新鮮精子、冷藏運輸附睪尾部精子及用凍存精子進(jìn)行體外受精的方法各有不同，請分別依照具體方法操作。
要點：使用的精子不同，體外受精用的受精培養(yǎng)基（CARD MEDIUM）的制備方法也不同。請仔細(xì)閱讀受精用培養(yǎng)基的操作說明書準(zhǔn)備受精用培養(yǎng)皿。
參考文獻(xiàn)
【1】Nakagata N, Takeo T, Fukumoto K, Kondo T, Haruguchi Y, Takeshita Y, Nakamuta Y, Matsunaga H, Tsuchiyama S, Ishizuka Y, Araki K. 2013. Applications of cryopreserved unfertilized mouse oocytes for invitro fertilization.Cryobiology.Oct；67（2）：188-92.
授權(quán)一級代理請認(rèn)準(zhǔn)金山科研平臺，產(chǎn)品價格和貨期請咨詢微信：jinshanbio ，詢價請加微信：jinshanbio
? 如需詢價，請加客服QQ：1749072012 、客服微信：jinshanbio，或發(fā)送郵件到1749072012@qq.com
? 平臺為生命科學(xué)研究相關(guān)領(lǐng)域提供一站式耗材試劑儀器解決方案和采購服務(wù)，數(shù)據(jù)資源基于CC協(xié)議。
? 本文地址：http://www.5460.com.cn/thread-59317.htm
特別聲明：以上內(nèi)容(如有圖片亦包括在內(nèi))來源于授權(quán)廠家或網(wǎng)絡(luò)，如有侵權(quán)，請聯(lián)系客服刪除，本平臺不提供信息校正和存儲服務(wù)。
Notice: The content above (including the pictures if any)comes from authorized manufacturers or networks. In case of infringement, please contact to delete it. This platform does not provide information storage services.
QQ:1749072012