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回到小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)指南目錄

回到小鼠生殖工程凍存及培養(yǎng)試劑

◆材料

1、用CARD冷藏運(yùn)輸試劑盒運(yùn)輸?shù)男∈蟾讲G尾2、FERTIUP^?精子預(yù)孵培養(yǎng)基（Cosmo Bio Co., Ltd）3、mHTF4、電動(dòng)移液器（GILSON PIPETMAN P-200）5、黃色槍頭（BM機(jī)器 Cat.No.110-96R）6、流動(dòng)石蠟（nacalai Cat.No.26137-85）7、培養(yǎng)皿（Corning 35mm×10mm Cat.No.430588）8、解剖用的剪刀（夏目制造所 小直剪刀 Cat.No.B-12）9、解剖用的鉗子（夏目制造所 尖鉗子 Cat.No.A-45）10、濾紙11、CO₂ 培養(yǎng)箱

◆方法

1、 取出附睪尾的前30分鐘，制作精子預(yù)孵用培養(yǎng)皿（一個(gè)100μL FERTIUP^?精子預(yù)孵培養(yǎng)基滴液），靜置在培養(yǎng)箱里。

2、 從泡沫箱里取出保溫瓶，再從保溫瓶內(nèi)的紙盒里取出裝有附睪尾的0.2mL EP管。3、 打開0.2mL EP管的蓋子，取出附睪尾放在濾紙上，擦干附睪尾表面的凍存液。

※用剪刀和鉗子來除去附睪尾上留有多余的脂肪、組織、血液。

4、 在清洗用培養(yǎng)皿的mHTF滴液內(nèi)清洗3次附睪尾，用濾紙擦干附睪尾上mHTF。※清洗用培養(yǎng)皿（3個(gè)大約100μL 的mHTF滴液），取出的附睪尾直接在此清洗。

5、 把附睪尾浸泡在精子預(yù)孵用培養(yǎng)皿的流動(dòng)石蠟里。

6、 在附睪尾部采集精子，供體外受精用，采集的精子進(jìn)行體外受精的步驟與用新鮮精子受精的步驟相同。

要點(diǎn)：在附睪尾的切口處采集精子時(shí)，如果精子難以露出，就往切口處再切深點(diǎn)，盡量采集更多的精子。

注意：用冷藏精子的受精培養(yǎng)基（CARD MEDIUM^?)的調(diào)試方法與用新鮮精子受精的方法有差異，請(qǐng)?jiān)敿?xì)閱讀受精培養(yǎng)基的使用說明，準(zhǔn)備受精用培養(yǎng)皿。

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