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上海金山科研平臺(tái)生物科技有限公司代理New England Biolabs（NEB）酶試劑全線產(chǎn)品，歡迎訪問(wèn)官網(wǎng)了解更多產(chǎn)品信息和訂購(gòu)。

產(chǎn)品資料 – 核酸純化 – 基因組DNA提取Monarch^? 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織） 收藏

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特性

· 用于從組織、細(xì)菌和其它樣品（酵母、昆蟲(chóng)、兩棲動(dòng)物）中提取高分子量 DNA

· 從軟組織和細(xì)菌中提取純化的 DNA 片段大小達(dá)到 Mb 范圍

· 對(duì)于一些樣品，通過(guò)改變裂解過(guò)程中的離心速度，調(diào)節(jié)提取 DNA 的片段大小

· 操作流程簡(jiǎn)單、便捷（組織和細(xì)菌樣品 90 分鐘）

· 獲得的 DNA 產(chǎn)量、純度和完整性極佳

· 快速、高效的洗脫

· 是長(zhǎng)片段測(cè)序的理想選擇

· 包含 RNase A 和蛋白酶 K，以及微管研棒便于樣品勻漿

產(chǎn)品說(shuō)明

Monarch^® 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）為從組織、細(xì)菌及其它樣品（包含酵母、昆蟲(chóng)和兩棲動(dòng)物）中提取完整的高分子量（HMW）gDNA 提供了快速的操作流程。針對(duì)于組織的提取方案為：首先使用研棒勻漿和蛋白酶 K 攪拌裂解樣品，然后進(jìn)行蛋白質(zhì)去除，并將提取的 DNA 附著到大玻璃珠的表面。如果提取樣品為細(xì)菌，則需要在蛋白酶 K 消化之前，使用溶菌酶對(duì)細(xì)菌細(xì)胞壁進(jìn)行充分裂解。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)流程提取的 DNA 在 50-250 kb 之間，如果將離心速度降到最低，提取的 DNA 片段可達(dá) Mb 范圍。純化后的 DNA 產(chǎn)量和純度極高，且?guī)缀跬耆缓?RNA。組織和細(xì)菌樣品提取時(shí)間為 90 分鐘。組織和細(xì)菌 A260 / A280 檢測(cè)純度為 1.8-1.9，組織 260/230 檢測(cè)純度為 2.1-2.5，細(xì)菌 260/230 檢測(cè)純度為 2.1-2.2。純化后的 HMW DNA 適用于多種下游應(yīng)用，包括長(zhǎng)片段測(cè)序（Oxford NanoporeTechnologies®和 PacificBiosciences^®），光學(xué)圖譜（BionanoGenomics^®）和 Linked-Reads 基因組組裝。

圖 1：使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒從組織中提取純化 HMW DNA 的操作流程

圖 2：Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）可從多種樣品中高效提取純化高質(zhì)量的 HMW DNA

使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）提取 HMW 基因組 DNA。提取樣品為：凍存大鼠腎臟 10 mg、新鮮小鼠肝臟 10 mg、凍存小鼠大腦 20 mg、新鮮小鼠肌肉 20 mg、凍存大腸桿菌 2 x 10⁹、蠟樣芽孢桿菌 2 x 10⁸、新鮮非洲爪蟾 4 mg、新鮮釀酒酵母 3.8 x 10⁸ 和凍存埃及埃及斑蚊 15 mg。參照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，離心速度為 2000 rpm。釀酒酵母使用經(jīng)調(diào)整的操作流程。從平行實(shí)驗(yàn)樣本中分別取 500 ng DNA 產(chǎn)物通過(guò) PFGE 分離（在 BioRad^® CHEF-DR^® III 系統(tǒng)上，使用 1％ 瓊脂糖凝膠，6 V / cm，13℃ 電泳 20 小時(shí)，切換時(shí)間為 0.5-94 秒）。各樣品的產(chǎn)量和純度見(jiàn)下表標(biāo)注。分子量標(biāo)準(zhǔn)為 Lambda PFG Ladder（NEB＃N0341）。

圖 3：在從組織和細(xì)菌中提取 HMW 基因組 DNA 的裂解過(guò)程中，使用不同的離心速度可調(diào)節(jié)提取片段長(zhǎng)度

使用 Monarch 高分子量 DNA 提取試劑盒（組織）提取純化 HMW 基因組，測(cè)試樣品為小鼠腎臟（10 mg，圖 3A）和大腸桿菌 NEB10 beta（1 x 10⁹ 細(xì)胞，圖 3B）。在裂解步驟中，按照?qǐng)D中標(biāo)注的速度離心樣品，以控制 DNA 的片段化。從平行實(shí)驗(yàn)樣本中取等量的 DNA 產(chǎn)物（小鼠腎臟：300 ng；大腸桿菌：500 ng）通過(guò) PFGE 分離（在 BioRad^® CHEF-DR^® III 系統(tǒng)上，使用 1％ 瓊脂糖凝膠，6 V / cm，13℃ 電泳 20 小時(shí)，切換時(shí)間為 0.5-94 秒）。分子量標(biāo)準(zhǔn)為 Lambda PFG Ladder（NEB＃N0341）。各樣品的產(chǎn)量、純度和 DIN 值見(jiàn)下表標(biāo)注。

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