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Cell Counting Kit-8簡稱CCK-8試劑盒，是一種基于WST-8的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。

WST-8是一種類似于MTT的化合物，在電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色的formazan（參考圖1）。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，則顏色越淺。對于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。

圖1. WST-8檢測原理圖 （EC=electron coupling reagent，即電子耦合試劑）

WST-8是MTT的一種升級替代產(chǎn)品，和MTT或其它MTT類似產(chǎn)品如XTT、MTS等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而WST-8和XTT、MTS產(chǎn)生的formazan都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8產(chǎn)生的formazan比XTT和MTS產(chǎn)生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加穩(wěn)定，使實驗結(jié)果更加穩(wěn)定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比線性范圍更寬，靈敏度更高。

WST-8和WST-1相比，檢測靈敏度更高，更易溶解，并且更加穩(wěn)定。

本試劑盒可以用于細(xì)胞因子等誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖檢測，也可以用于抗癌藥物等對細(xì)胞有毒試劑誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性檢測，或一些藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞生長抑制檢測。

本試劑盒檢測非常便捷。試劑盒僅一管已經(jīng)配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，無須再進(jìn)行任何配制等操作。無須使用同位素，所有的檢測步驟僅在同一塊96孔板內(nèi)完成。不必洗滌細(xì)胞，不必收集細(xì)胞，也不必采用額外的步驟去溶解formazan。可以用于大批量樣品的檢測。

酚紅和血清對本試劑盒的測定無明顯影響。

WST-8對細(xì)胞無明顯毒性。加入WST-8顯色后，可以在不同時間反復(fù)用酶標(biāo)儀讀板，使檢測時間更加靈活，便于找到*測定時間。

本試劑盒可以測定500個樣品。

包裝清單：

保存條件：

4℃避光保存一年有效，-20℃避光保存兩年有效。

注意事項：

由于使用96孔板進(jìn)行檢測，如果細(xì)胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)的問題。一方面，由于96孔板周圍一圈zui容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈的辦法，改加PBS，水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把96孔板置于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。

本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應(yīng)，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，例如一些抗氧化劑會干擾檢測，需設(shè)法去除。

用酶標(biāo)儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用說明：

1. 通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000個細(xì)胞（具體每

孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等因素決定）。按照實驗需要，進(jìn)行培養(yǎng)

并給予0-10微升特定的藥物刺激。

2. 每孔加入10微升CCK-8溶液。如果起始的培養(yǎng)體積為200微升，則需加入20微升CCK-8溶液，其它情況以

此類推。可以用加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對照。如果擔(dān)心所使用

的藥物會干擾檢測，需設(shè)置加了相應(yīng)量細(xì)胞培養(yǎng)液、藥物和CCK-8溶液但沒有加入細(xì)胞的孔作為空白對

照。

3. 在細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育0.5-4小時，對于大多數(shù)情況孵育1小時就可以了。時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類

型和細(xì)胞的密度等實驗情況而定，初次實驗時可以在0.5、1、2和4小時后分別用酶標(biāo)儀檢測，然后選取

吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

4. 在450nm測定吸光度。如無450nm濾光片，可以使用420-480nm的濾光片。可以使用大于600nm的波長，例

如650nm，作為參考波長進(jìn)行雙波長測定。