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qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit（1000*50ul）

使用SYBR Green I進(jìn)行兩步法RT-PCR，用于基因表達(dá)分析

整合熱啟動(dòng)，PCR特異性高可靠定量檢測(cè)低豐度轉(zhuǎn)錄本準(zhǔn)確定量檢測(cè)各種起始量樣本提供含有或不含尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）兩種包裝無(wú)需優(yōu)化反應(yīng)和循環(huán)條件

qiagen QuantiTect SYBR Green PCR Kit（1000*50ul）

Real-Time PCR酶與試劑盒qPCR16一步法RT-PCR20兩步法RT-PCR29QuantiTect SYBR^®Green PCR Kits

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使用SYBR Green I進(jìn)行兩步法RT-PCR，用于基因表達(dá)分析

整合熱啟動(dòng)，PCR特異性高可靠定量檢測(cè)低豐度轉(zhuǎn)錄本準(zhǔn)確定量檢測(cè)各種起始量樣本提供含有或不含尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）兩種包裝無(wú)需優(yōu)化反應(yīng)和循環(huán)條件

QuantiTect SYBR Green PCR Kit使用SYBR Green I通過(guò)兩步法real-time RT-PCR對(duì)cDNA目標(biāo)序列進(jìn)行高特異性的定量檢測(cè)。熱啟動(dòng)和*的實(shí)時(shí)定量PCR緩沖液確保了對(duì)cDNA目標(biāo)序列高特異性和靈敏度的real-time定量檢測(cè)。dNTP混合液含有dUTP，可選擇性進(jìn)行UNG處理。為便于使用，預(yù)混液可儲(chǔ)存在2–8°C。

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特異性定量檢測(cè)。

在Rotor-Gene 3000上使用針對(duì)人BAX的QuantiTect Primer Assay和的試劑盒分析稀釋的人白細(xì)胞cDNA。熔解曲線(xiàn)分析中出現(xiàn)單峰，NTC反應(yīng)呈平直曲線(xiàn)，說(shuō)明使用QuantiTect Kit和Assay可實(shí)現(xiàn)高特異性定量。NTC：無(wú)模板對(duì)照。Norm. Fluoro.：標(biāo)準(zhǔn)化的熒光。

Performance

QuantiTect SYBR Green PCR Kit在寬泛的范圍內(nèi)符合線(xiàn)性規(guī)律，可實(shí)現(xiàn)特異性定量檢測(cè)（參見(jiàn)"Specific quantification over a wide linear range"）。與其他聚合酶相比，HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴(yán)格的熱啟動(dòng)，進(jìn)一步提高了PCR反應(yīng)的特異性。*的PCR緩沖液和HotStarTaq DNA Polymerase，確保低豐度轉(zhuǎn)錄本的定量檢測(cè)，低至5個(gè)拷貝的目標(biāo)序列也可被準(zhǔn)確檢測(cè)（參見(jiàn)"Highly specific amplification"）。QuantiTect SYBR Green PCR Kit與QuantiTect Reverse Transcription Kit和QuantiTect Primer Assays配合使用，可獲得靈敏、可靠的結(jié)果（參見(jiàn)"Specific and sensitive quantification"）。

QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit中經(jīng)特別優(yōu)化的UNG溶液配合經(jīng)驗(yàn)證的PCR預(yù)混液可有效避免PCR產(chǎn)物中的殘留污染，并對(duì)靶序列進(jìn)行可靠的定量檢測(cè)（參見(jiàn)"High specificity in real-time PCR"）。

Principle

QuantiTect SYBR Green PCR Kit含有優(yōu)化的即用型預(yù)混液，可使用SYBR Green I對(duì)cDNA靶序列進(jìn)行高特異性和靈敏度的real-time定量分析。預(yù)混液中的熒光染料SYBR Green I可對(duì)很多不同的靶序列進(jìn)行分析，無(wú)需合成靶標(biāo)特異性標(biāo)記引物。*的PCR緩沖液含有K⁺和NH₄⁺，能促使特異性引物退火，獲得高PCR特異性和靈敏度（參見(jiàn)"Specific primer annealing"）。此外，HotStarTaq DNA Polymerase具有嚴(yán)格的熱啟動(dòng)，可防止非特異性產(chǎn)物的形成。

QuantiTect SYBR Green PCR預(yù)混液含有dUTP，可在PCR前使用尿嘧啶DNA糖基化酶 （UNG）預(yù)處理，保證之前反應(yīng)殘留的PCR產(chǎn)物會(huì)影響后續(xù)的PCR反應(yīng)。

2x QuantiTect SYBR Green PCR Kit的組份

組份	特點(diǎn)	優(yōu)勢(shì)
HotStarTaq DNA Polymerase	95ºC孵育15分鐘即可活化	室溫下即可構(gòu)建qPCR反應(yīng)體系
QuantiTect SYBR Green PCR Buffer	NH4+和K+的平衡組合	特異性引物退火確保PCR結(jié)果可靠
dNTP mix	含有dUTP，會(huì)部分替代dTTP，可進(jìn)行UNG處理	可選擇進(jìn)行UNG處理，以消除之前反應(yīng)殘留的PCR產(chǎn)物
SYBR Green I dye	DNA雙鏈結(jié)合時(shí)，生成強(qiáng)烈的熒光信號(hào)	高度靈敏的定量檢測(cè)
ROX dye	在Applied Biosystems或Agilent的PCR儀上進(jìn)行熒光信號(hào)校準(zhǔn)	可在需要ROX染料的PCR儀上進(jìn)行準(zhǔn)確的定量檢測(cè)。不會(huì)干擾其他real-time PCR儀

Procedure

QuantiTect SYBR Green PCR Kit無(wú)需進(jìn)行繁瑣耗時(shí)的反應(yīng)條件優(yōu)化。只需簡(jiǎn)單地將引物、探針和cDNA模板加入到即用型PCR預(yù)混液中，即可開(kāi)始反應(yīng)（參見(jiàn)"Two-step RT-PCR"）。使用操作手冊(cè)中的實(shí)驗(yàn)方案可在任何real-time PCR儀上得到快速、可靠的結(jié)果。如果需要，反應(yīng)液可用尿嘧啶DNA糖基化酶（UNG）預(yù)處理，以去除之前反應(yīng)殘留的PCR產(chǎn)物。

為在兩步法real-time RT-PCR中獲得理想結(jié)果，我們推薦使用QuantiTect Reverse Transcription Kit合成cDNA。此試劑盒可在20分鐘內(nèi)快速合成cDNA，并可去除基因組DNA污染。

QuantiTect SYBR Green PCR Kit配合QuantiTect Primer Assays可在基因表達(dá)分析中獲得高度特異性的結(jié)果。基因組范圍、生物信息學(xué)驗(yàn)證的引物對(duì)覆蓋所有人類(lèi)、小鼠、大鼠和其他各類(lèi)生物基因。QuantiTect Primer Assays可在GeneGlobe上方便地訂購(gòu)。