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天恩澤可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒 160903-100，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
產(chǎn)品品牌：天恩澤
產(chǎn)品名稱：可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒
英文名稱：Controlled Error-prone PCR Kit
產(chǎn)品貨號(hào)：160903-100
產(chǎn)品規(guī)格：100次
產(chǎn)品價(jià)格：1900元

天恩澤可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒 160903-100

我們上海金山科研平臺(tái)公司作為天恩澤公司的代理商，先簡(jiǎn)單介紹一下天恩澤公司：

北京天恩澤公司的目標(biāo)是研發(fā)出技術(shù)先進(jìn)、質(zhì)量穩(wěn)定、價(jià)格合理的試劑精品。公司的創(chuàng)立宗旨是技術(shù)至上、質(zhì)量至上、服務(wù)至上，公司的產(chǎn)品研發(fā)團(tuán)隊(duì)均為高學(xué)歷并在海外有長(zhǎng)期的科研經(jīng)驗(yàn)；公司的管理團(tuán)隊(duì)已在行業(yè)內(nèi)擁有超過(guò)20年管理經(jīng)驗(yàn)；同樣，公司的運(yùn)營(yíng)團(tuán)隊(duì)也有豐富的執(zhí)行經(jīng)驗(yàn)。

北京天恩澤公司充分了解客戶的需求，并努力創(chuàng)新以滿足客戶不斷發(fā)展的需求。我們將與我們的客戶共同成長(zhǎng)，成為生物技術(shù)領(lǐng)域中zhuoyue產(chǎn)品和服務(wù)的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天凈沙、克必隆、歸去來(lái)、好亦多均為天恩澤基因注冊(cè)商標(biāo)(試劑類)。

天恩澤可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒 160903-100，產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

產(chǎn)品品牌：天恩澤

產(chǎn)品名稱：可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒

英文名稱：Controlled Error-prone PCR Kit

產(chǎn)品貨號(hào)：160903-100

產(chǎn)品規(guī)格：100次

產(chǎn)品價(jià)格：1900元

運(yùn)輸：低溫

保存：-20℃保存

有效期：1年

貨期：1-2天

產(chǎn)品介紹：

可調(diào)節(jié)突變率

天恩澤可調(diào)式易錯(cuò)PCR試劑盒 160903-100，產(chǎn)品特點(diǎn)：

易錯(cuò)PCR（error-prone PCR）是利用Taq DNA 多聚酶不具有 3′→5′校對(duì)功能的特性，

在一定條件下（如不同的 dNTP 濃度、Mg 濃度和 MnCl2存在）能夠按較高的機(jī)率引入隨機(jī)引入突變。如果有適當(dāng)?shù)倪x擇方法，則可從構(gòu)建的突變庫(kù)選出所需突變體。易錯(cuò) PCR 和常規(guī)PCR的比較如下：

本產(chǎn)品是在本公司的易錯(cuò) PCR試劑盒基礎(chǔ)上改進(jìn)而得，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，十分簡(jiǎn)單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。

2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)人員在一定范圍內(nèi)可以控制突變率，一輪 PCR 的突變率范圍在2-8突變/1000bp，更高的突變率可以通過(guò)多輪PCR達(dá)到。

3. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。

4. 可以擴(kuò)增的 DNApian段更長(zhǎng)，達(dá)到2kb，對(duì)于2kb 以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。

5. 本試劑盒足夠100 次30uL 體系的易錯(cuò)PCR。

本產(chǎn)品是在本公司的易錯(cuò) PCR試劑盒基礎(chǔ)上改進(jìn)而得，本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，十分簡(jiǎn)單方便，尤其在生物制藥和酶學(xué)研究領(lǐng)域顯示出了它的優(yōu)越性。

2. 配方經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，實(shí)驗(yàn)人員在一定范圍內(nèi)可以控制突變率，一輪 PCR 的突變率范圍在2-8突變/1000bp，更高的突變率可以通過(guò)多輪PCR達(dá)到。

3. 可用于連續(xù)易錯(cuò) PCR（sequential error-prone PCR），只需把上一次易錯(cuò) PCR 的產(chǎn)物用作下一次易錯(cuò)PCR的模板即可，使每一次獲得的小突變累積而產(chǎn)生重要的有益突變。

4. 可以擴(kuò)增的 DNApian段更長(zhǎng)，達(dá)到2kb，對(duì)于2kb 以上的產(chǎn)物，建議分段擴(kuò)增。

5. 本試劑盒足夠100 次30uL 體系的易錯(cuò)PCR。

規(guī)格及成分

運(yùn)輸及保存：低溫運(yùn)輸，-20℃保存, 有效期為一年。

自備試劑：引物、DNA模板、常規(guī) PCR 試劑盒。

使用方法：

1. 將引物稀釋到10uM。引物也是決定易錯(cuò) PCR 成敗的關(guān)鍵因素，設(shè)計(jì)引物時(shí)要保證其Tm 在 70℃，長(zhǎng)度在 25-30nt 之間，GC 含量在45%-60%之間，3 端 GC 含量低，并且沒(méi)有發(fā)夾結(jié)構(gòu)。

2. 用自備易錯(cuò) PCR 引物和常規(guī) PCR 試劑擴(kuò)增制備易錯(cuò) DNA 模板（常規(guī) PCR 產(chǎn)物），膠回收并準(zhǔn)確確定濃度。注意：易錯(cuò) PCR 的模板一定要用膠回收的常規(guī) PCR 產(chǎn)物，因?yàn)槟z回收會(huì)可以把電泳不可見(jiàn)的非特異性擴(kuò)增片段去除，否則這些片段由于也是用易錯(cuò) PCR 引物擴(kuò)增所得，在易錯(cuò) PCR擴(kuò)增時(shí)也會(huì)被擴(kuò)增，產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)抑制，降低靶分子的擴(kuò)增效率。如果常規(guī)PCR制備模板的引物和易錯(cuò) PCR 引物不同（類似巢式 PCR）則可以避免此問(wèn)題，但需要合成兩對(duì)引物。

3. 將回收的 DNApian段（模板）稀釋到1ng/uL 、10ng/uL 和100ng/uL三個(gè)濃度。注意：模板使用量是影響突變率的重要因素，模板 DNA 為非突變 DNA，擴(kuò)增產(chǎn)生的 DNA 為突變 DNA，易錯(cuò)PCR體系終 DNA 量是基本固定的，因此模板 DNA 使用量越大，則突變 DNA在終產(chǎn)物中的相對(duì)比例就越低，突變率就越低。反之亦然。但模板太少又不容易擴(kuò)增成功，所以建議同時(shí)測(cè)試兩個(gè)模板用量。如果都成功，則優(yōu)先選用模板濃度低的 PCR 產(chǎn)物進(jìn)行分析。

4. 根據(jù)每1000bp的預(yù)期突變數(shù)按下表確定30uL易錯(cuò)PCR體系中MnCl2和dGTP的用量（這是在模板DNA不超過(guò)1ng的前提下的數(shù)據(jù)）。表中的Mn表示易錯(cuò)PCR的MnCl2, dG表示易錯(cuò) PCR的dGTP：

5. shouci次建議設(shè)置 3 個(gè)模板濃度。在 3 干凈的 PCR 管中，分別加入下列成分（這里是設(shè)置30uL 的反應(yīng)體系，如果反應(yīng)體系不是30 uL，則各成分用量需要按等比例增加或減少） ：

6. 按已經(jīng)優(yōu)化的常規(guī) PCR條件進(jìn)行易錯(cuò) PCR：

注：易錯(cuò) PCR 一般不需要熱啟動(dòng)，也不需要在PCR結(jié)束后做延伸處理。長(zhǎng)度每增加 1Kb，時(shí)間延長(zhǎng)1 分鐘。易錯(cuò) PCR 循環(huán)次數(shù)越多，突變DNA（擴(kuò)增產(chǎn)物）與非突變 DNA（模板）的比例就越高。此外在突變率和模板長(zhǎng)度恒定的情況下，擴(kuò)增次數(shù)越多，發(fā)生突變的數(shù)就越高，在同一模板上發(fā)生的突變位點(diǎn)數(shù)就越多，所以shouci次實(shí)驗(yàn)時(shí)keyi做 30、35、40、45、50、55、60 次7 個(gè)循環(huán)數(shù)的比較。

7. 電泳檢測(cè)是否得到預(yù)計(jì)長(zhǎng)度的PCR產(chǎn)物。如果沒(méi)有，可以調(diào)整模板用量和 PCR 參數(shù)。

8. 膠回收易錯(cuò) PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物、克隆并對(duì)單菌落進(jìn)行功能篩選或測(cè)序分析、如果需要增加突變率，可以以突變后的 DNA 為模板，進(jìn)行下一輪易錯(cuò) PCR。

疑難解答

Q：現(xiàn)象：沒(méi)有 PCR產(chǎn)物。

A：可能原因：一是引物沒(méi)有優(yōu)化，可以重新設(shè)計(jì)引物；二是模板 DNA 太少，可以增加用量；三是模板不純，keyi先膠回收；四是 DNA 溶液中有 EDTA，可以適當(dāng)補(bǔ)加Mg++。

Q：現(xiàn)象：太多的 PCR 條帶或PCR條帶模糊一片。

A：可能原因：一是模板有膠回收、二是 PCR 循環(huán)數(shù)太多；三是復(fù)性溫度太低；四是引物沒(méi)有優(yōu)化；五是 PCR 條件沒(méi)優(yōu)化，可以使用 touch-down PCR。

Q: 如果需要更高的突變率，如何辦？

A: 可以使用連續(xù)多次易錯(cuò) PCR 來(lái)提高突變率。但先用膠純化回收易錯(cuò) PCR片段,再用于下一輪易錯(cuò) PCR。此外不能用少于千分之一的shouci次易錯(cuò)PCR產(chǎn)物作為第二輪易錯(cuò)PCR的模板，否則多樣性將受到影響。第三輪易錯(cuò) PCR keyi使用所有第二輪的易錯(cuò) PCR 產(chǎn)物作為模板，但需要在10mL 體系中完成（可以分成很多100uL 體系進(jìn)行）。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：易錯(cuò)PCR試劑盒（CAT#:101005-100）

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