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天恩澤包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝 100302-100，產(chǎn)品簡介;
產(chǎn)品品牌：天恩澤
產(chǎn)品名稱：包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝
英文名稱：Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit
產(chǎn)品貨號：100302-100
產(chǎn)品規(guī)格：100次
產(chǎn)品價格：1490元

天恩澤包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝 100302-100

我們上海金山科研平臺公司作為天恩澤公司的代理商，先簡單介紹一下天恩澤公司：

北京天恩澤公司的目標是研發(fā)出技術(shù)先進、質(zhì)量穩(wěn)定、價格合理的試劑精品。公司的創(chuàng)立宗旨是技術(shù)至上、質(zhì)量至上、服務(wù)至上，公司的產(chǎn)品研發(fā)團隊均為高學(xué)歷并在海外有長期的科研經(jīng)驗；公司的管理團隊已在行業(yè)內(nèi)擁有超過20年管理經(jīng)驗；同樣，公司的運營團隊也有豐富的執(zhí)行經(jīng)驗。

北京天恩澤公司充分了解客戶的需求，并努力創(chuàng)新以滿足客戶不斷發(fā)展的需求。我們將與我們的客戶共同成長，成為生物技術(shù)領(lǐng)域中zhuoyue產(chǎn)品和服務(wù)的jijia提供者。

DNAout、RNAout、Erasol、天凈沙、克必隆、歸去來、好亦多均為天恩澤基因注冊商標(試劑類)。

天恩澤包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝

天恩澤包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝 100302-100，產(chǎn)品簡介;

產(chǎn)品品牌：天恩澤

產(chǎn)品名稱：包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝

英文名稱：Inclusion Body Solubilization and Refolding Kit

產(chǎn)品貨號：100302-100

產(chǎn)品規(guī)格：100次

產(chǎn)品價格：1490元

運輸：常溫

保存：常溫

有效期：1年

貨期：1-2天

產(chǎn)品介紹：

包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝，提供10種條件供優(yōu)化

天恩澤包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝 100302-100，產(chǎn)品特點：;

E . c o li 作為宿主表達得到的重組蛋白往往會形成包涵體，其中的重組蛋白 質(zhì)只完成部分折疊，還沒形成后的正確空間結(jié)構(gòu)，所以沒有生物活性，要得到有 活性的重組蛋白，還需要后續(xù)的溶解和復(fù)性（重折疊）處理。目前jichangyong的溶解包 涵體的方法是用尿素，Sarkosyl，鹽酸胍等強變性劑，其缺點是包涵體中的重組蛋 白質(zhì)被*變性，使后續(xù)的蛋白質(zhì)復(fù)性處理效率降低。由于包涵體中的重組蛋白質(zhì) 已經(jīng)完成了部分折疊，因此本公司基于此事實設(shè)計出了此款溫和溶解-復(fù)性試劑盒， 它具有下列特點：

1. 一站式，提供包涵體洗滌、溶解和蛋白質(zhì)復(fù)性的所有試劑。

2. 采用溫和法溶解包涵體，釋放的包涵體蛋白質(zhì)不*變性，還能保持其部分折 疊的結(jié)構(gòu)，使后續(xù)的復(fù)性處理效率提高。

3. 所用復(fù)性液基于稀釋復(fù)性，經(jīng)過精心優(yōu)化，有利于大部分蛋白的復(fù)性。

4. 還提供五種不同的添加劑，它們可以單獨加入復(fù)性液，也可以按一定比例進行 自由組合，以適應(yīng)不同的蛋白質(zhì)折疊需求。

5. 本試劑盒提供實惠的小規(guī)格，用于做預(yù)實驗用，用戶如果選擇到合適的溶液組 合后，可以單獨購買其中任何一個溫和溶液以用于大量制備。

6. 本試劑盒足夠100次小規(guī)模（1mL規(guī)模）的蛋白質(zhì)復(fù)性實驗。

天恩澤包涵體蛋白溶解及復(fù)性套裝

運輸及保存：常溫運輸和保存，有效期一年。

自備試劑：去離子水、BCA蛋白濃度測定試劑盒、0.22 um注射器式濾膜

使用方法：

一、洗滌包涵體：用常規(guī)方法得到的包涵體常常含有去污劑和細胞碎片，因此需要經(jīng)過充分的洗滌才能用于本實驗。

1. 將10mg包涵體沉淀溶解在5mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹 打混勻得包涵體懸液。可以適當預(yù)留此步得30uL包涵體懸液作為SDS-PAGE 電泳樣品待用。其余的在4℃ 12000 rpm 離心20分鐘，棄上清留沉淀。

2. 重復(fù)上面的洗滌步驟3次，每次預(yù)留30uL 包涵體懸液作為電泳樣品待用。

3. 將包涵體沉淀溶解在1mL包涵體洗滌液中，超聲波處理8次或充分吹打混勻 再得包涵體懸液。

4. 檢查包涵體的純度：將上步得到的包涵體懸液和前幾步得到的包涵體懸液一起 用于SDS-PAGE 電泳，檢查每次洗滌去除雜帶的情況。

5. 檢查包涵體的濃度：用自備的BCA蛋白檢測試劑盒測試第4步得到的包涵體 懸液的蛋白質(zhì)濃度。

6. 將第4步得到的包涵體懸液的蛋白質(zhì)濃度調(diào)到5-10 mg/mL(如果測得值低于 此范圍，則重復(fù)本實驗，只是離心后用更少量的洗滌液溶解；如果測得值高于 此范圍，則用適量洗滌液稀釋)，然后將包涵體懸液均分到10個1.5mL塑料 離心管中，每管100 uL。

7. 4℃ 12000rpm 離心20分鐘后棄上清。所得沉淀即純化的、待用的包涵體。

二、確定溶解包涵體的jijia溶解液：

8. 標記上步得到的 10 個離心管，并分別加入 10種包涵體溫和溶解液，每種 1 mL。注意：準確記錄離心管編號和加入溶解液編號的對應(yīng)關(guān)系。

9. 充分振蕩后，室溫放置30分鐘。

10. 450 nm 檢測渾濁度并記錄下數(shù)據(jù)。

11. 4℃ 12000rpm 離心10分鐘后收集上清，此溶液含有溶解的包涵體蛋白質(zhì)。

12. 用0.22 um 注射器式濾膜過濾上步所得溶液。280 nm 檢測其光吸收。

13. 溶解液溶解包涵體蛋白的能力跟包涵體溶液濁度跟成反比，跟溶解液OD280 光吸收成正比。根據(jù)上面的數(shù)據(jù)即可確定哪種溶解液對實驗中所用包涵體具有jijia溶解能力（OD 值jigao者有大溶解包涵體蛋白的能力），并將選用此溶解液用于下面的復(fù)性實驗。本試劑盒提供的10種包涵體溶解液均可以另購。

三．包涵體蛋白的復(fù)性：

14. 在2.5 mL 4℃預(yù)冷的、處于輕柔攪拌中的復(fù)性緩沖液中，逐滴加入上步得到 的OD280數(shù)值jigao的包涵體溶解液。

15. 待所有包涵體溶解液都加完后，將包涵體蛋白復(fù)性溶液用孔徑為0.22 um 注 射器式濾膜過濾，除去包涵體（直徑一般在0.5-0.8 um）和大的聚合物。 16. 將得到的復(fù)性蛋白溶液用于活性檢測或離子交換柱層析和分子篩層析等實驗。

技術(shù)資料：

包涵體

包涵體是指細菌表達的蛋白在細胞內(nèi)凝集，形成無活性的固體顆粒。一般含有 50%以上的重組蛋白，其余為核糖體成份、質(zhì)粒DNA、脂多糖等，大小為0.5-1um， 難溶于水，只溶于變性劑如尿素、鹽酸胍等。包涵體可以避免蛋白酶對表達蛋白的 降解，其形成降低了胞內(nèi)表達蛋白的濃度，故有利于表達量的提高。此外，包涵體 中雜蛋白含量較低，且簡單的低速離心就可將其分離純化。后，包涵體對機械攪 拌和超聲破碎不敏感，易于并與細胞膜碎片分離。

包涵體的形成原因之一是重組蛋白表達量過高，表達量越高越容易形成包涵 體。原因可能是合成速度太快，以至于沒有足夠的時間進行折疊，二硫鍵不能正確 的配對，過多的蛋白間的非特異性結(jié)合，蛋白質(zhì)無法達到足夠的溶解度等。原因之 二是重組蛋白含硫氨基酸較多，而脯氨酸的含量也與包涵體的形成呈正相關(guān)。此外， 發(fā)酵溫度高或胞內(nèi)pH接近蛋白的等電點也容易誘發(fā)包涵體的形成。異源重組蛋白 缺乏翻譯后修飾所需酶類，致使中間體大量積累，也容易形成包涵體沉淀。共表達 分子伴侶的方法可以降低包涵體的形成。

關(guān)聯(lián)產(chǎn)品：菌體內(nèi)毒素清楚劑

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