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Biofilm Formation Assay試劑貨號(hào)：B601 生物被膜形成量/抑制能力檢測(cè)試劑盒 可以檢測(cè)生物被膜的形成量和抑制生物被膜形成能力 商品信息 儲(chǔ)存條件：陰暗處保存 運(yùn)輸條件：常溫 選擇規(guī)格： 96tests 活動(dòng)進(jìn)行中 規(guī)格性狀 產(chǎn)品概述 特長(zhǎng)和操作 產(chǎn)品特點(diǎn) 操作 產(chǎn)品選擇指南 Biofilm關(guān)聯(lián)產(chǎn)品 檢測(cè)實(shí)例 參考文獻(xiàn) 常見問(wèn)題Q&A

活動(dòng)進(jìn)行中

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湊單關(guān)聯(lián)產(chǎn)品TOP5

NO.1.Microbial Viability Assay Kit-WST微生物活性檢測(cè)

NO.2.Biofilm Viability Assay生物被膜藥物殺傷效果檢測(cè)

NO.3. Biofilm TestPiece Assay Kit材料表面生物被膜形成能力檢測(cè)

NO.4. CTC細(xì)菌計(jì)數(shù)、染色

NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit細(xì)菌活力檢測(cè)

規(guī)格性狀

?Crystal Violet Solution 22 ml×1

?96-peg-Lid×1

?96-well Plate ×10

在針狀孔板蓋(96-peg-Lid)的針狀突起表面形成生物被膜

產(chǎn)品概述

生物被膜(Biofilm)是一種主要由細(xì)菌體外的多糖組成的膜狀復(fù)合體，可以在幾乎所有的環(huán)境下廣泛存在。醫(yī)療器具的細(xì)菌污染、齲齒、牙周炎等感染癥等都與生物被膜的形成有關(guān)。由于生物被膜一旦形成，會(huì)對(duì)抗生素等藥物產(chǎn)生抗性，進(jìn)而引起嚴(yán)重的污染問(wèn)題。因此，具有抑制生物被膜活性的藥物和食品成分成為近年來(lái)的研究熱點(diǎn)。

Biofilm Formation Assay Kit是通過(guò)結(jié)晶紫(Crystal Violet)法，對(duì)生物被膜形成量和藥物對(duì)生物被膜抑制能力進(jìn)行檢測(cè)的試劑盒。檢測(cè)過(guò)程中，生物被膜在孔板蓋的針形突起表面生長(zhǎng)，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脫落。同時(shí)，通過(guò)使用多孔板，可以一次性進(jìn)行多樣品檢測(cè)。

結(jié)晶紫(Crystal Violet)染色法

1982年，Pedersen通過(guò)對(duì)比結(jié)晶紫(Crystal Violet)的吸光度與各種微生物生成的生物被膜的干燥重量，發(fā)現(xiàn)兩者呈線性相關(guān)。因此結(jié)晶紫染色法作為最經(jīng)典的生物被膜檢測(cè)法一直沿用至今。

參考文獻(xiàn)：K.Pedersen,”Methodfor Studying Microbial Biofilms in Flowing-Water Systems”,Appl. Environ. Microbiol., 1982,43(1), 6.

特長(zhǎng)和操作

BiofilmFormationAssayKit的特長(zhǎng)和操作

產(chǎn)品特點(diǎn)

特點(diǎn)①檢測(cè)時(shí)間大幅縮短

傳統(tǒng)的多孔板檢測(cè)方法是在96孔板的內(nèi)壁和底部生成生物被膜，在細(xì)菌的培養(yǎng)和清洗等過(guò)程中，需要一個(gè)孔一個(gè)孔的進(jìn)行操作，增加了大量的操作步驟和時(shí)間。而本試劑盒檢測(cè)方法中，生物被膜在針狀突起孔板蓋的突起表面生成，只需移動(dòng)孔板蓋就可完成，使得操作變得異常簡(jiǎn)便。

特點(diǎn)②減小復(fù)孔間的孔間差

由于傳統(tǒng)法是在96孔板的內(nèi)壁和底部形成生物被膜，在清洗等操作時(shí)非常容易造成生物被膜的脫落，所以復(fù)孔間的孔間差過(guò)大一直是傳統(tǒng)方法的一大弊端。本試劑盒的方法是在孔板蓋的突起處的表面形成生物被膜，大幅減少操作中生物被膜脫落的情況。

<使用本方法的參考文獻(xiàn)>

T.Tsukatani, F. Sakata, R. Kuroda, “A rapid and simple measurement method for biofilm formation inhibitory activity using 96?pin microtiter plate lids”,World J. Microbiol.Biotechnol.,2020, doi:10.1007/s11274-020-02964-6.

I. Okamoto etc.,“Antibacterial and Antibiofilm Photodynamic Activities of Lysozyme-Au Nanoclusters/Rose Bengal Conjugates”,ACS Omega,2021,doi:10.1021/acsomega.1c00838

操作

本試劑盒可以對(duì)生物被膜形成量和藥物對(duì)生物被膜抑制能力進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)過(guò)程中，生物被膜在孔板蓋的針形突起表面生長(zhǎng)，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脫落。同時(shí)，通過(guò)使用多孔板，可以一次性進(jìn)行多樣品檢測(cè)。

產(chǎn)品選擇指南

針對(duì)兩種不同用途的試劑盒選擇

使用針狀孔板蓋(96 Peg-Lid)的試劑盒一共有兩款，分別通過(guò)結(jié)晶紫染色法和WST顯色法進(jìn)行檢測(cè)，供您根據(jù)具體的需求自由選擇。

兩種試劑盒的選擇方法

*不同的菌種，生物被膜的形成條件(培養(yǎng)基、培養(yǎng)時(shí)間等)也不相同。建議先使用Biolfilm Formation Assay Kit(本產(chǎn)品)進(jìn)行摸索。具體的摸索方法請(qǐng)參考FAQ “如何摸索生物被膜最佳實(shí)驗(yàn)條件”

*本試劑盒是由同仁化學(xué)研究所和日本福岡縣工業(yè)技術(shù)中心—生物食品研究所共同開發(fā)。

Biofilm關(guān)聯(lián)產(chǎn)品

本系列的其他產(chǎn)品介紹

用檢測(cè)片評(píng)價(jià)抗菌材料對(duì)生物被膜的抑制能力

Biofilm TestPiece Assay Kit(貨號(hào)：B606)

需要對(duì)抗菌材料的生物被膜抑制能力進(jìn)行評(píng)價(jià)的時(shí)候，使用同仁化學(xué)研究所獨(dú)自研發(fā)出的TestPiece Holder(檢測(cè)片固定蓋)可以大幅縮短檢測(cè)時(shí)間，并且得到重現(xiàn)性更高的檢測(cè)數(shù)據(jù)。

與傳統(tǒng)法的比較

菌種：Staphylococcus aureusNBRC13276

復(fù)孔數(shù)：n=8

檢測(cè)實(shí)例

常見的生物被膜檢測(cè)指標(biāo)有兩種：MBIC(Minimum Biofilm Inhibitory Concentrations,抑制生物被膜形成的最低濃度)和MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentrations,細(xì)菌生物被膜的最小清除濃度)。下面用各試劑盒分別檢測(cè)對(duì)S.aureus(金黃葡萄球菌)的MBIC和MBEC。

常見問(wèn)題Q&A

Q: 如何摸索生物被膜的最佳實(shí)驗(yàn)條件?

A：一般對(duì)于生物被膜最佳實(shí)驗(yàn)條件的摸索項(xiàng)目有：培養(yǎng)基的種類、細(xì)菌的接種濃度、培養(yǎng)基的更換次數(shù)、培養(yǎng)時(shí)間、培養(yǎng)溫度等。　　下面針對(duì)培養(yǎng)基的種類、細(xì)菌的接種濃度、培養(yǎng)基的更換次數(shù)、培養(yǎng)時(shí)間作為檢測(cè)實(shí)例進(jìn)行摸索。如果要摸索培養(yǎng)溫度的最佳條件，需要準(zhǔn)備多個(gè)Biofilm Formation Assay Kit(B601)。 摸索實(shí)驗(yàn)例1 不同的培養(yǎng)基種類、細(xì)菌播種濃度、培養(yǎng)基交換條件下，檢測(cè)生物被膜的形成量。 (孔板設(shè)置例) 日程表 *每隔24 h更換一次新的培養(yǎng)基。 操作步驟： 1)第1天：96-well Plate①的A行和B行的每個(gè)孔中播種180 μl用培養(yǎng)基A至D制備的濃度①和②的細(xì)菌溶液。C行~H行留空，蓋上96-peg Lid，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 例: 細(xì)菌濃度①約107 CFU/ml，細(xì)菌濃度②約106 CFU/ml。 2) 第二天：將180 μl不含細(xì)菌的培養(yǎng)基加至96孔板②的A、B行的孔中。如圖例所示，C、D行的各孔中加入180 μl培養(yǎng)基A~D配制的細(xì)菌濃度①和②細(xì)菌懸液。E行~H行留空。 將步驟1)中的96-peg Lid 蓋在96-well Plate②上，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 3) 第三天：將180 μl不含細(xì)菌的培養(yǎng)基加至96-well Plate③的A行~D行各孔中，如圖例所示，E、F行的各孔中加入180 μl培養(yǎng)基A~D配制的細(xì)菌濃度①和②細(xì)菌懸液。G、H行留空。 將步驟2)中的96-peg Lid 蓋在96-well Plate③上，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 4) 第4天：將180 μl不含細(xì)菌的培養(yǎng)基加至96-well Plate④的A行~F行各孔中，如圖例所示，G、H行的各孔中加入180 μl培養(yǎng)基A~D配制的細(xì)菌濃度①和②細(xì)菌懸液。 將步驟3)中的96-peg Lid 蓋在96-well Plate④上，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 5）按照操作說(shuō)明書的“生物被膜形成量 /生物被膜形成抑制能力”操作步驟的2~6，在新的96孔板中進(jìn)行操作。 摸索實(shí)驗(yàn)例2 不同的培養(yǎng)基種類、細(xì)菌播種濃度、培養(yǎng)時(shí)間條件下，檢測(cè)生物被膜的形成量。 (孔板設(shè)置例) 日程表 1)第1天：96-well Plate①的A行和B行的每個(gè)孔中播種180 μl用培養(yǎng)基A至D制備的濃度①和②的細(xì)菌溶液。C行~H行留空，蓋上96-peg Lid，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 例: 細(xì)菌濃度①約107 CFU/ml，細(xì)菌濃度②約106 CFU/ml。 2) 第二天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A行和B行不更換培養(yǎng)基，C、D行的各孔中加入180 μl培養(yǎng)基A~D配制的細(xì)菌濃度①和②細(xì)菌懸液。E行~H行留空。 重新將96-peg Lid 蓋在96-well Plate①上，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 3) 第三天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A~D行不更換培養(yǎng)基。E、F行的各孔中加入180 μl培養(yǎng)基A~D配制的細(xì)菌濃度①和②細(xì)菌懸液。G、H行留空。 重新將96-peg Lid 蓋在96-well Plate①上，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 4) 第4天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A~F行不更換培養(yǎng)基。G、H行的各孔中加入180 μl培養(yǎng)基A~D配制的細(xì)菌濃度①和②細(xì)菌懸液。 重新將96-peg Lid 蓋在96-well Plate①上，在適宜溫度下培養(yǎng)24 h。 5）按照操作說(shuō)明書的“生物被膜形成量 /生物被膜形成抑制能力”操作步驟的2~6，在新的96孔板中進(jìn)行操作。

Q：目前有過(guò)檢測(cè)實(shí)例的菌種有哪些？

A：目前Biofilm Formation Assay Kit(本產(chǎn)品)以及同系列產(chǎn)品Biofilm Viability Assay Kit (貨號(hào)：B603)有過(guò)實(shí)際檢測(cè)案例的菌種有： ?Staphylococcus aureus（金黃葡萄球菌） ?Pseudomonas aeruginosa（綠膿桿菌） ?Escherichia coli（大腸桿菌） ?Streptococcus mutans（蟲牙的病原菌之一） ?Porphyromonas gingivalis（牙周病的發(fā)病原因之一） 以上菌種的詳細(xì)培養(yǎng)條件等請(qǐng)參考產(chǎn)品說(shuō)明書。

Q：做細(xì)菌被膜抑制藥物的藥效評(píng)價(jià)時(shí)，生物被膜的形成量至少要達(dá)到什么程度？

A：使用Biofilm Formation Assay Kit (本產(chǎn)品)時(shí)，操作步驟的最后一步，檢測(cè)結(jié)晶紫(CV)溶液的吸光度時(shí)， O.D.在0.5(590 nm)以上為宜。