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ACE Kit – WST試劑盒貨號(hào)：A502 用于檢測(cè)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑活性的試劑盒 ACE Kit – WST 商品信息 儲(chǔ)存條件：0-5度保存 運(yùn)輸條件：室溫 選擇規(guī)格： 100tests 50tests

概述

血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)可以通過血壓調(diào)節(jié)機(jī)制之一的腎素-血管緊張素系統(tǒng)，將血管緊張素Ⅰ(AngiotensinⅠ)轉(zhuǎn)化成具有升壓作用的血管Ⅱ(AngiotensinⅡ)。同時(shí)，它還可以分解降壓肽之一的緩激肽(Bradyinin)，是一種與血壓上升有很大關(guān)系的酶。近年來，市面上有許多以預(yù)防高血壓為目的的功能性食品(特定保健用途食品)，而其中具有ACE抑制活性的食品備受關(guān)注。傳統(tǒng)的ACE抑制活性檢測(cè)法是通過測(cè)定馬尿酸在228nm處的吸光度來計(jì)算的，馬尿酸是從合成底Hippuryl-His-Leu中生成，經(jīng)過乙酸乙酯溶劑提取、濃縮干燥、再溶解得到的。該方法需要使用乙酸乙酯等有害的有機(jī)溶劑，且操作復(fù)雜，容易產(chǎn)生測(cè)量誤差，因此急需一種操作更簡(jiǎn)單、結(jié)果更準(zhǔn)確的檢測(cè)方法。同仁化學(xué)研究所開發(fā)的ACE Kit-WST是一種新型酶法檢測(cè)試劑盒。通過檢測(cè)3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly(3HB-GGG)中得到的3-Hydroxybutyric acid(3HB)，可以更安全、快速、簡(jiǎn)單的檢測(cè)ACE抑制活性。本方法還可以使用96孔板進(jìn)行多樣品檢測(cè)，進(jìn)一步提高了檢測(cè)的快捷性和重現(xiàn)性。

檢測(cè)原理

特點(diǎn)

檢測(cè)過程約2小時(shí)

檢測(cè)時(shí)，只需要將樣品溶液和試劑加入96孔板，培養(yǎng)(60 min; 10 min)，檢測(cè)吸光度即可。

與傳統(tǒng)法的比較

本試劑盒對(duì)應(yīng)96孔板酶標(biāo)儀檢測(cè)，可以一次檢測(cè)多個(gè)樣品。而且無需使用有毒性的有機(jī)溶劑，可以更安全、快速、簡(jiǎn)便的得到高重現(xiàn)性的檢測(cè)結(jié)果。

實(shí)驗(yàn)例

東當(dāng)歸處理過程中ACE抑制活性的變化³⁾

日本奈良縣農(nóng)業(yè)綜合技術(shù)中心的淺尾研究員使用本試劑盒對(duì)日本大和地區(qū)的東當(dāng)歸在收獲過程中，ACE抑制活性(IC50值)的變化進(jìn)行了研究。研究結(jié)果對(duì)收獲過程中的處理操作在ACE抑制活性方面的藥理學(xué)影響有重要參考價(jià)值。

樣品的前處理

各樣品經(jīng)過凍結(jié)干燥、粉碎成粉后加入20倍的蒸餾水，在40℃下振蕩(100 rpm)30 min，最后通過離心分離(3000 ×g, 10 min)獲得的上清液作為樣品溶液。

抑制曲線例

檢測(cè)波長：450 nm

橫坐標(biāo)為樣品濃度

參考文獻(xiàn)

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常見問題Q&A

Q1：可以檢測(cè)ACE活性嗎？
A1：不可以檢測(cè)ACE活性。 本試劑盒是檢測(cè)ACE抑制劑活性的試劑盒。
Q2：本試劑盒的優(yōu)點(diǎn)是什么？
A2：優(yōu)點(diǎn)是 安全、快速、簡(jiǎn)便。 「無需使用有機(jī)溶劑」、 「一次檢測(cè)多個(gè)樣品」、 「實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性高」 *傳統(tǒng)方法需要使用乙酸乙酯進(jìn)行溶解、濃縮干燥再檢測(cè)。操作非常繁雜，容易引入誤差。
Q3：可以檢測(cè)多少個(gè)樣品？
A3：根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康牟煌謩e準(zhǔn)備了「確認(rèn)抑制活性的有無」和「檢測(cè)IC50」兩種操作步驟。 Protocol 1：n=3時(shí)，可檢測(cè)14個(gè)樣品(50 tests)，28個(gè)樣品(100 tests) Protocol 2：n=3時(shí)，可檢測(cè)2個(gè)樣品(50 tests)，4個(gè)樣品(100 tests) 詳情請(qǐng)參考產(chǎn)品說明書。
Q4：樣品在前處理的時(shí)候有什么需要注意的嗎？
A4：「樣品前處理實(shí)例(蔬菜/水果等)」 樣品為食品時(shí)，首先將樣品研磨勻漿，然后離心分離，取上清液為樣品溶液。如果樣品有混濁，請(qǐng)通過過濾和稀釋等手段，盡量保證樣品呈澄清狀。如果樣品本身有顏色，適當(dāng)稀釋至不影響檢測(cè)的范圍內(nèi)。（詳見說明書）檸檬酸等酸性較強(qiáng)的樣品(pH4~5)，會(huì)使Substrate buffer中的3HB-GGG發(fā)生沉淀，影響檢測(cè)。可加入少量碳酸氫鈉粉末，中和后離心分離，取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
Q5：樣品中有非水溶性物質(zhì)，是否可以檢測(cè)？
A5：如果待測(cè)樣品是非水溶性的，先使用DMSO或乙醇溶解制成Stock solution，然后再用 Buffer進(jìn)行稀釋，并控制DMSO或乙醇的含量在1%以下。
	Q6：對(duì)檢測(cè)有影響的物質(zhì)有哪些？
A6：樣品中如果有還原性物質(zhì)或者氨基酰化酶等對(duì)3HBDH有抑制作用的物質(zhì)，會(huì)影響檢測(cè)。
Q7：如果將Enzyme B和Enzyme A的溶解順序顛倒的話會(huì)有什么問題嗎？
A7：會(huì)導(dǎo)致靈敏度降低。 請(qǐng)務(wù)必按照先用純水溶解Enzyme B，再用Enzyme B溶液溶解Enzyme A的順序。