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轉(zhuǎn)染試劑——HilyMax貨號：H357 陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑 HilyMax 商品信息 儲存條件：0-5度保存 運(yùn)輸條件：室溫

特點(diǎn)：

·脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑，毒性低

·胞慢病毒轉(zhuǎn)染率高

·實(shí)驗(yàn)案例豐富

選擇規(guī)格： 0.5 ml 1 ml

湊單關(guān)聯(lián)產(chǎn)品TOP5

NO.1.Cell Counting Kit-8細(xì)胞增殖毒性檢測

NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit細(xì)胞凋亡檢測

NO.3. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-細(xì)胞凋亡檢測

NO.4. Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit細(xì)胞凋亡檢測

NO.5. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST乳酸脫氫酶(LDH)檢測

試劑盒內(nèi)含

1 ml HilyMax Reagent 1 tube×1

LipoformBuffer 1.0 mL×1

產(chǎn)品概述

HilyMax 是Dojindo公司研發(fā)的一種新型陽離子脂質(zhì)體基因轉(zhuǎn)染試劑，可用于高效轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞系及siRNA。HilyMax具有不受培養(yǎng)基中血清影響，轉(zhuǎn)染過程不需更換培養(yǎng)基等特點(diǎn)。另外HilyMax試劑中不含影響轉(zhuǎn)染效率的成分。

產(chǎn)品特性

應(yīng)用：基因轉(zhuǎn)染

特點(diǎn)：

1.實(shí)驗(yàn)操作簡單

2.可用于貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的瞬轉(zhuǎn)及穩(wěn)轉(zhuǎn)。

3.適用于含血清的的培養(yǎng)基，毒性低，轉(zhuǎn)染效率高且穩(wěn)定。

4.適用于SiRNA的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

5.與同類進(jìn)口產(chǎn)品相比，價格較低。

訂購前請來電咨詢各細(xì)胞系的相關(guān)條件優(yōu)化

各細(xì)胞系GFP轉(zhuǎn)染實(shí)例

實(shí)驗(yàn)操作

基本操作：轉(zhuǎn)染步驟（24孔板）^a)

1．細(xì)胞準(zhǔn)備

貼壁細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，調(diào)整細(xì)胞濃度在0.5 ml的培養(yǎng)基中預(yù)先接種40%-90%的匯合細(xì)胞^b），轉(zhuǎn)染前將細(xì)胞懸液接種至24孔板。

懸浮細(xì)胞：轉(zhuǎn)染前一天，調(diào)整細(xì)胞濃度至每0.5 ml的培養(yǎng)基中0.1-1.6×10⁶的細(xì)胞，細(xì)胞懸液接種至24孔板。

2．形成DNA-HilyMax轉(zhuǎn)染復(fù)合物^c）

添加不含血清的培養(yǎng)基至消毒離心管。^d)

添加質(zhì)粒DNA（0.5-1，5μg）至離心管，使用移液器充分混合。

添加HilyMax至離心管，使用移液器充分混合，推薦的DNA（μg）與HilyMax的使用比率為1:2-1:6。

在室溫下培養(yǎng)15分鐘^e)

3．添加轉(zhuǎn)染復(fù)合物至細(xì)胞：在步驟1準(zhǔn)備好的培養(yǎng)板上，每孔中添加DNA-HilyMax轉(zhuǎn)染復(fù)合物。

4．培養(yǎng)：在37℃下放置于CO₂培養(yǎng)箱培養(yǎng)。^f)

5．檢測：確保轉(zhuǎn)染后24至72小時，基因的活性

a)實(shí)驗(yàn)用量需要根據(jù)培養(yǎng)板大小而改變，請參考說明書“不同培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染狀況”部分。

b)培養(yǎng)基中血清成分不會影響轉(zhuǎn)染效果。

c)DNA及HilyMax的參考密度見表1。

d)培養(yǎng)基中的血清及抗生素會影響DNA-HilyMax轉(zhuǎn)染復(fù)合物的形成。Opti-MEM, DMEM和MEM不會影響轉(zhuǎn)染效果，請使用其他培養(yǎng)基來檢驗(yàn)轉(zhuǎn)染效率。

e)培養(yǎng)時間超過30分鐘會造成轉(zhuǎn)染效率偏低。

f)轉(zhuǎn)染后更換培養(yǎng)基可以有效地提高轉(zhuǎn)染效率，降低某些細(xì)胞系的毒性。

轉(zhuǎn)染復(fù)合物中DNA與HilyMax的使用量：

表1：表明了不同細(xì)胞密度下推薦的DNA和HilyMax量。如果轉(zhuǎn)染效率較低，請適當(dāng)提高HilyMax的量；

如果毒性過高，請適當(dāng)降低HilyMax的使用量。

表2：表明了不同大小培養(yǎng)板的系數(shù)。這些系數(shù)是在24孔板下計算得出的，表1中DNA和HilyMax的數(shù)據(jù)可以乘上這些系數(shù)。

不同培養(yǎng)板轉(zhuǎn)染狀況：

表3：不同培養(yǎng)板適合的培養(yǎng)基、DNA的使用量以及DNA和HilyMax混合比率列。

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7推薦轉(zhuǎn)染條件：

NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7在24孔板培養(yǎng)的最適轉(zhuǎn)染條件顯示在表4中，每種細(xì)胞系DNA和HilyMax溶液最適量及其密度以及轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)的基本操作。

若使用其他培養(yǎng)板請參考表3。

轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)基的更換：

轉(zhuǎn)染后更換培養(yǎng)基可以有效地提高NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7的轉(zhuǎn)染效率（請見表圖）。

這五種細(xì)胞系轉(zhuǎn)染后2到4小時更換培養(yǎng)基可以獲得更高的轉(zhuǎn)染率。

表4：五種細(xì)胞的實(shí)例

24孔板上轉(zhuǎn)染發(fā)生于80%匯合細(xì)胞中， DNA和 HilyMax 分別為 1μg和3-7μl。轉(zhuǎn)染1至8小時后,更換新的培養(yǎng)基

有詳細(xì)操作方案的細(xì)胞種類：

（歡迎來電或郵箱索取各細(xì)胞系操作優(yōu)化條件）

?A549 Cell ?HepG2 Cell ?MDCK Cell ?Caco2 Cell ?K562 Cell

?Neuro2a Cell ?Vero Cell ?CHO Cell ?L6 Cell ?NIH3T3 Cell

?HEK293 Cell ?LNCap Cell ?PC3 Cell ?HeLa Cell ?MCF7 Cell ?PC12 Cell

技術(shù)情報

使用HilyMax及I社產(chǎn)品轉(zhuǎn)染率對比

使用HilyMax及R社產(chǎn)品Luciferase表達(dá)比較

★細(xì)胞系：用于HEK293、NIH3T3、CHO、HeLa、COS-7轉(zhuǎn)染效果較好，具體請參考下列圖表（實(shí)驗(yàn)案例）

★DNA：用于純化質(zhì)粒DNA（A280/A260=1.7-1.9）推薦轉(zhuǎn)染的DNA濃度為0.15-1.0 mg/ml。轉(zhuǎn)染中DNA的最佳使用量取決于細(xì)胞的類型及細(xì)胞密度。

★HilyMax：轉(zhuǎn)染時HilyMax的最佳使用量取決于細(xì)胞的類型及細(xì)胞密度。若HilyMax使用量過低會致使轉(zhuǎn)染效率低，而使用量過高則會產(chǎn)生較強(qiáng)的毒性，請在第一次實(shí)驗(yàn)時把DNA（μg）與HilyMax的使用比率控制在1:1-1:6之間。

★細(xì)胞密度：推薦的轉(zhuǎn)染細(xì)胞密度為40%-90%的匯合細(xì)胞，最佳細(xì)胞密度取決于細(xì)胞類型。

★轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)基的更換：在轉(zhuǎn)染后更換培養(yǎng)基可以提高轉(zhuǎn)染效率，還可降低一些細(xì)胞系的毒性。推薦轉(zhuǎn)染2到4小時后更換培養(yǎng)基

HilyMax的使用準(zhǔn)備:

添加1.0 ml Lipoform緩沖液于HilyMax試劑中，使用渦旋器振蕩混合30秒。請檢查HilyMax試劑是否完全溶解，如果溶液中仍有部分不溶殘留物，需繼續(xù)振蕩或使用移液器充分混勻，直到完全溶解。

提醒：轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞種類、細(xì)胞濃度以及DNA與HilyMax的混合比例等情況有關(guān)，請參照以下優(yōu)化條件操作。

儲存注意事項(xiàng)：

試劑盒保存在0-5℃

添加過Lipoform緩沖液的HilyMax溶液在-20℃下可以儲存6個月。

若經(jīng)常使用， HilyMax溶液可放置于在0-5℃下， 請在1-2個月內(nèi)用完。

解凍開啟過的HilyMax溶液，需使用渦旋器和移液器使其充分混勻。

HilyMax溶液在反復(fù)冷凍和解凍后會有小部分出現(xiàn)不溶，但這并不會影響轉(zhuǎn)染效果。

參考文獻(xiàn)

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常見問題Q&A

Q1、基因轉(zhuǎn)染后需要更換培養(yǎng)基嗎？

A1、如果您想讓細(xì)胞毒性更低或者轉(zhuǎn)染效率更高一些，建議更換培養(yǎng)基。但是有些細(xì)胞（如CHO細(xì)胞）案例，更換培養(yǎng)基不會影響毒性和轉(zhuǎn)染率。

Q2、轉(zhuǎn)染效果不好的情況下，應(yīng)當(dāng)考慮調(diào)整哪些方面？（DNA量，HilyMax量，復(fù)合物形成比，時間等）

A2、<細(xì)胞毒性低> 轉(zhuǎn)染效率極低的情況下，可以增加DNA量，或是DNA（μg）：HilyMax（μL）=1:5～1:9。 可以提高轉(zhuǎn)染效率。 <細(xì)胞毒性高> 可以減少DNA量或HilyMax量。

Q3、說明書中寫了保存條件為“冷藏”和“冷凍”兩種。怎么保存比較好呢？一開始就冷凍，一直冷藏是不行的嗎？

A3、未開封、未使用時請“冷藏保存”，試藥和緩沖液混合溶解后請“冷凍保存”。即使在未開封的狀態(tài)下冷凍保存，質(zhì)量也沒有問題，但是使用時需要將冷凍的Lipoform Buffer融化。 另外，溶解后如果在2~3周內(nèi)用完的話，即使“冷藏保存”也不會影響性能。超過數(shù)周使用時，請務(wù)必“冷凍保存”。

Q4、DNA-Hilymax轉(zhuǎn)染復(fù)合物培養(yǎng)是否超過30分鐘？

A4、超過30分鐘的培養(yǎng)會造成過低的轉(zhuǎn)染率。

Q5、DNA和Hilymax的量是否為最優(yōu)比率？

A5、DNA和Hilymax的量的比率會較大影響轉(zhuǎn)染效率，請參考表1優(yōu)化轉(zhuǎn)染。某些條件下，增大DNA或HIlymax的使用量會提高轉(zhuǎn)染效率，如果轉(zhuǎn)染效率仍很低，那么優(yōu)化后請改變DNA(ug)：Hilymax(ul)比率至1：7-1：9或把DNA量提高到1.5-2倍。若毒性過強(qiáng)，請降低Hilymax在DNA-Hilymax轉(zhuǎn)染復(fù)合物中的比率。