Rhod 2-AM試劑貨號：R002
1-[2-Amino-5-(3-dimethylamino-6-dimethylammonio-9-xanthenyl)phenoxy]-2-(2-amino-5-methylphenoxy)ethane-N,N,N’,N’-tetraacetic acid, tetraacetoxymethyl ester, chloride
CAS號： 129787-64-0
商品信息
儲存條件：-20度保存，避光
運輸條件：室溫
分子式：
C52H59ClN4O19
分子量：
1079.49
特點：
● 激發(fā)光557nm，發(fā)射光581nm
●紅色熒光與羅丹明相似
● 定位準確，信號強度高
選擇規(guī)格：
1 mg
產(chǎn)品性狀
規(guī)格
性狀： 本產(chǎn)品為暗紫色固體，使用時將固體溶解于無水DMSO中
純度（HPLC）: 98%以上
熒光光譜圖 ： 符合實驗要求
NMR光譜圖 ： 符合實驗要求
處理條件
保存方法 ： 避光冷凍
產(chǎn)品概述
在所有的鈣離子指示劑中，Rhod 2熒光信號的波長最長。它具有和羅丹明類似的激發(fā)和發(fā)射波長，分別為557 nm和581 nm。這樣的激發(fā)波長使得我們很容易就能找到氬和氪光源的激光。盡管有人認為Rhod 2的熒光信號僅僅將鈣復(fù)合物的熒光增加了數(shù)倍，但是Dojindo的Rhod 2由于具有很高的純度，能有效地將鈣熒光信號增加80-100倍左右，使得它的信號強度在所有的鈣離子探針里面是最強的。所以，我們強烈建議使用Rhod 2作為探針用激光顯微鏡來檢測細胞內(nèi)的鈣離子情況。有報道稱，特別是在神經(jīng)組織切片培養(yǎng)方面Rhod 2具有定位點的輪廓線更加清晰的特點。Rhod 2和鈣離子的解離常數(shù)為（Kd＝1.0 mM），在所有的鈣離子熒光探針中是最高的，為監(jiān)測鈣離子濃度提供了一個廣闊的范圍。Rhod 2-AM是一種Rhod 2的乙酰甲酯衍生物，能非常容易的通過AM法負載到細胞內(nèi)。
原理
與其他探針一樣，Rhod 2-AM是將四個羧基全部作為脂溶性乙基甲酯體的細胞膜透明性物質(zhì)。可以很容易地被細胞吸收。通過細胞內(nèi)的脂肪酶水解成為Rhod 2，可以檢測細胞內(nèi)Ca2+。
激發(fā)發(fā)射波長
E x ：557 nm
Em： 581 nm
溶解比例
溶解比例：1mg/ml（DMSO)，50mg/ml（三氯甲烷）
注意事項
1、試劑容易吸潮，從冰箱取出后，請確認在干燥的環(huán)境放至室溫后再開封。由于試劑極其微量，
開封前，請輕彈管壁幾次，以保證粉末落入管底。
2、第一次使用時, 建議母液即配即用。試劑溶解后盡可能在短時間內(nèi)使用，以保證實驗效果。
3、溶解液 DMSO 需要保證新鮮無水，否則將會導致 AM 體水解，熒光染料無法進入細胞影響實驗效果。
4、母液遇水極易分解，如果不能一次用完，建議分裝保存，例如分裝成 5 μl/管，用封口膜封口，
并用鋁箔紙包裹，放在一個密閉性能好的塑料袋中，并放入一包干燥劑，在≤-20℃密封避光保存。
5、建議您在正式實驗前先摸索一下細胞量、鈣離子熒光探針的終濃度、培養(yǎng)時間等，找到最佳實驗條件
參考文獻
1) R. Y. Tsien, “New Calcium Indicators and Buffers with High Selectivity against Magnesium and Protons: Design, Synthesis, and Properties of Prototype Structures”, Biochemistry, 1980, 19 (11), 2396.
2) R. Y. Tsien, T. Pozzan and T. J. Rink, “Calcium Homeostasis in Intact Lymphocytes: Cytoplasmic Free Calcium Monitored with a New, Intracellularly Trapped Fluorescent Indicator”, J. Cell Biol., 1982, 94, 325.
3) M. B. Feinstein, J. J. Egan, R. I. Sha’afi and J. White, “The Cytoplasmic Concentration of Free Calcium Inplatelets Is Controlled by Stimulators of Cyclic AMP Production (PGD2, PGE1, FORSKOLIN)”, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1983, 113, 598.
4) N. Miyoshi, K. Hara, S. Kimura, K. Nakanishi and M. Fukuda, “A New Method of Determining Intracellular Free Ca2+ Concentration Using Quin 2-fluorescence”, Photochem. Photobiol., 1991, 53 (3), 415.
Q&A
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Q1:細胞內(nèi)檢測鈣離子的試劑種類都有什么，選擇什么樣的比較好呢？ |
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A1: 根據(jù)檢測儀器和檢測波長有很多的選擇，產(chǎn)品后面標有AM的試劑是可以通過細胞膜的
有很多種相似的試劑，其特點如下：
【Fura 2】
?雙波長激發(fā)
激發(fā)(λex= Ca:340 nm, Ca free:380 nm)、發(fā)射：λem=500 nm
?解離常數(shù)：224 nmol/L
?因為是熒光強度的比值、可以有效的減小誤差
=>細胞內(nèi)Ca濃度計算。
?該試劑被使用的最多
?必須要更換過濾片、會耽誤一些時間。
【Fluo 3】
?單波長激發(fā)
激發(fā)：λex=508 nm、發(fā)射：λem=527 nm
?解離常數(shù)：400 nmol/L
?因為激發(fā)光在長波段，所以對細胞的損傷比較小
（不會受到NADH、NADPH的影響）
?可以使用Ar激光激發(fā)裝置。
?不適合切片中鈣離子的檢測
?【Fluo 4】
?單波長激發(fā)
?激發(fā)：λex=495 nm、發(fā)射：λem=518 nm
?解離常數(shù)：360 nmol/L
?與Fluo3相比對熒光強度更高。
?因為激發(fā)光在長波段，所以對細胞的損傷比較小
?（不會受到NADH、NADPH的影響）
?可以使用Ar激光激發(fā)裝置。 ?與Fluo3相比對細胞的毒性低
?【Indo 1】
?單波長激發(fā)
?激發(fā)：λex= 330 nm、發(fā)射(λem= Ca:410 nm, Ca free:485 nm)
?解離常數(shù)：250 nmol/L
?由于不需要更換濾光片，可以很快地檢測細胞內(nèi)鈣離子濃度變化以及像心肌細胞運動中鈣離子的變化
?（需要兩臺檢測儀器）
?【Rhod 2】
?單波長激發(fā)
?激發(fā)：λex=553 nm、發(fā)射：λem=576 nm
?解離常數(shù)：1.0 μmol/L
?因為激發(fā)光在長波段，所以對細胞的損傷比較小
?（不會受到NADH、NADPH的影響）
?可以使用Ar激光激發(fā)裝置。
?【Quin 2】
?單波長激發(fā)
?激發(fā)：λex=339 nm、發(fā)射：λem=492 nm
?解離常數(shù)：110 nmol/L
?最早開發(fā)的產(chǎn)品 |
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