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-Cellstain- Hoechst 33258 solution細胞核染色試劑貨號：H341 2′-(4-Hydroxyphenyl)-5-(4-methyl-1-piperazinyl)-2,5′-bi-1H-benzimidazole, trihydrochloride CAS號：23491-45-4 商品信息 儲存條件：0-5度保存，避光 運輸條件：室溫 分子式：

C₂₅H₂₇Cl₃N₆O

分子量：

533.88

特點：

● 可用于活/死細胞DNA檢測

● 藍色熒光，毒性低

● 試劑盒穩(wěn)定性高。

選擇規(guī)格： 1ml

規(guī)格

特性：該產品為黃色液體。

內容：試驗成功

產品概述

熒光染料Hoechst 33258是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，也稱bisBenzimide H 33258或HOE 33258,常用于細胞凋亡檢測。

Hoechst 33258是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料，對細胞的毒性較低。

Hoechst染料可透過細胞膜并對DNA染色而發(fā)出強烈的藍色熒光。它們在聚AT序列的富集區(qū)域的小溝處與DNA結合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持穩(wěn)定。Hoechst-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別為350 nm和460 nm。

熒光特性

λex=350nm, λem=461nm

原理

操作說明

染色步驟

1.用PBS或適當?shù)木彌_液制備10-50μMHoechst染料溶液。^a）

2.在細胞培養(yǎng)基中加入體積為細胞培養(yǎng)基1/10的Hoechst染料溶液。^b）

3.將細胞在37oC下孵育10-20分鐘。

4.用PBS或適當?shù)木彌_液清洗細胞兩次。

5.在帶有350 nm激發(fā)和460 nm發(fā)射濾光片的熒光顯微鏡下觀察細胞。

a）由于赫斯特染料可能具有致癌性，因此在處理過程中必須格外小心。

b）或者您可以用1/10濃度的Hoechst染料緩沖溶液代替培養(yǎng)基。

文獻

1)M. J.Lydon,K. D.Keeler andD. B.Thomas, “Vital DNA Staining and Cell Sorting by Flow Microfluorometry”,J. Cell Physiol.,1980,102(2), 175.

2)M.Sriram, van derG. A.Marel,H. L.Roelen, vanJ. H.Boo andA. H.Wang, “Structural Consequences of a Carcinogenic Alkylation Lesion on DNA: Effect of O6-ethylguanine on the Molecular Structure of the d(CGC[e6G]AATTCGCG)-netropsin Complex”,Biochemistry,1992,31(47), 11823.

3) T. Ohara and T. Tsuge, “FoSTUA, Encoding a Basic Helix-Loop-Helix Protein, Differentially Regulates Development of Three Kinds of Asexual Spores, Macroconidia, Microconidia, and Chlamydospores, in the Fungal Plant PathogenFusarium oxysporum”,Eukaryot. Cell,2004,3, 1412.

常見問題Q&A

Q1:如何使用Hoechst 33258。

A1：有多種使用方法，但以形態(tài)觀察為例。 它用作觀察凋亡細胞中核變化（染色質濃縮，斷裂）的簡便方法。 <試劑> ?細胞固定液：1％戊二醛/ PBS（-） ?熒光染色：1 mM Hoechst33258 / PBS（-） ?Dojindo的產物為[1 mg / mL]（約1.87 mmol / L） <操作方法> 1.將含有約1 x 106個細胞的細胞培養(yǎng)基以400Xg離心5分鐘，并棄去上清液。 2.加入100μL細胞固定溶液，并通過移液或類似方法混合。 3.在室溫下靜置30分鐘。 4.離心400Xg，5分鐘，棄去上清液。 加入1 mL PBS（-），用移液器等混合，以400Xg離心5分鐘，棄去上清液。 （*此時，戊二醛經常被洗滌和去除。可能會導致變色） 5.添加20μLPBS（-）并混合，然后添加4μL熒光染料并混合。 6.將1滴（5）的細胞溶液滴在載玻片上，蓋上玻璃蓋，然后按邊緣。 7.在熒光顯微鏡下觀察。 *由田沼靖（YasushiTanuma）指導的細胞工程獨立體積實驗規(guī)程系列“細胞凋亡實驗規(guī)程”

Q2：細胞染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長是多少。

A2：

Q3：Hoechst 33258和Hoechst 33342解決方案的激發(fā)波長和發(fā)射波長及其區(qū)別。

A3:波長如下。 Hoechst33342 Ex：350 nmEm：461 nm Hoechst33258 Ex：352 nmEm：461 nm 兩者的基本用法是相同的。 我們的產品是水溶液，所以稀釋至所需濃度并添加。 兩者之間的區(qū)別在于，它基本上是一種特異性結合腺嘌呤-胸苷部分的藥物。 它也穿過活細胞的膜并與活細胞的DNA結合。 Hoechst 33342的膜滲透性略高。 Hoechst 33258似乎是dsDNA的選擇性抗體。