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Cellstain- DAPI試劑貨號：D212 4’6-二脒-2-苯胺，二鹽酸鹽 Cellstain- DAPI 商品信息 儲(chǔ)存條件：-20度保存，避光 運(yùn)輸條件：室溫 分子式：

C₁₆H₁₇Cl₂N₅

分子量：

350.25

特點(diǎn)：

● 可用于流式細(xì)胞儀

● 活細(xì)胞核染色試劑

● 激發(fā)和發(fā)射波長分別為488 nm和530 nm

選擇規(guī)格： 1 mg 細(xì)胞染色

規(guī)格

特性：該產(chǎn)物為黃色至微黃色的綠棕色粉末或固體，可溶于水和稀鹽酸。

水溶性：試驗(yàn)成功

NMR光譜：試驗(yàn)成功

產(chǎn)品概述

熒光染料DAPI是一種可對DNA染色的細(xì)胞核染色試劑，常用于細(xì)胞凋亡檢測。DAPI是含有特定AT序列DNA的一種嵌入劑，它能像Hoechst染料一樣粘附在DNA雙螺旋的小溝區(qū)。盡管DAPI不能通過活細(xì)胞膜，但卻能穿透擾亂的細(xì)胞膜而對細(xì)胞核染色。DAPI具有很高的光漂白承受水平，能用來檢測酵母線粒體DNA，葉綠體DNA，病毒DNA，microplasm DNA以及染色體DNA。DAPI-DNA復(fù)合物的激發(fā)和發(fā)射波長分別為360 nm和460 nm。

熒光特性

λex=360 nm, λem=460 nm

操作說明

產(chǎn)品使用步驟

1.用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液制備10-50μMDAPI溶液。^a）

2.在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入體積為細(xì)胞培養(yǎng)基1/10的DAPI溶液。^b）

3.將細(xì)胞在37℃下孵育10-20分鐘。

4.用PBS或適當(dāng)?shù)木彌_液清洗細(xì)胞兩次。

5.使用帶有360 nm激發(fā)光和460 nm發(fā)射濾光片的熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。

a）由于DAPI可能致癌，因此在處理過程中必須格外小心。

b）或者您可以用1/10濃度的DAPI緩沖溶液代替培養(yǎng)基。

注意事項(xiàng)

制備DAPI儲(chǔ)備溶液時(shí)要用水（難溶于PBS）。

但是，那些溶解在水中的物質(zhì)不適合長期儲(chǔ)存。

考慮長期存儲(chǔ)時(shí)，請使用解決方案類型產(chǎn)品-Cellstain?-DAPI解決方案（代碼：D523），以提高解決方案的穩(wěn)定性。

文獻(xiàn)

1) W.Schnedl,A.V.Mikelsaar,M.Breitenbach and O.Dann,”DIPI and DAPI: Fluorescence Banding with Only Negligible Fading”,Hum. Genet.,1977,36,167.

2) I.W.Taylor and B.K.Milthorpe,”An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J.Histochem. Cytochem.,1980,28(11), 1224.

3) F.Otto and K.G.Tsou,”A Comparative Study of DAPI,DIPI,and Hoechst 33258 and 33342 as Chromosomal DNA Stains”,Stain Technol.,1985,60, 7.

4) N.Poulin, A.Harrison and B.Palcic,”Quantitative Precision of an Automated Image Cytometric System for the Measurement of DNA Content and Distribution in Cells Labeled with Fluorescent Nucleic Acid Stains”,Cytometry,1994,16,227.

5)M.Kawai,N.Yamaguchi and M.Nasu,”Rapid Enumeration of Physiologically Active Bacteria in Purified Water Used in the Pharmaceutical Manufacturing Process”,J.Appl. Microbiol.,1999,86(3),496.

常見問題Q&A

Q1核染色中所用染料的特征和區(qū)別是什么？

A1:這里引入的染料具有通過與核酸相互作用而發(fā)出熒光或增加熒光強(qiáng)度的特性。 除熒光波長以外的差異如下。 [EB] 它沒有堿基特異性，可與所有DNA和RNA結(jié)合。 它沒有活細(xì)胞的膜通透性，并且可以染色死細(xì)胞。 [PI] 像EB一樣，它沒有基礎(chǔ)特異性。它是一種更廣泛使用的染料，因?yàn)椴迦霑r(shí)它的熒光強(qiáng)度比EB高。 它沒有活細(xì)胞的膜通透性，并且可以染色死細(xì)胞。 [DAPI] 與雙鏈小槽結(jié)合。它與腺嘌呤-胸苷簇具有高度結(jié)合。 它沒有活細(xì)胞的膜通透性，并且可以染色死細(xì)胞。 [AO] 通過利用插入雙鏈時(shí)和與單鏈磷酸結(jié)合時(shí)熒光波長不同的事實(shí)，可以在雙鏈和單鏈之間進(jìn)行區(qū)分。 它滲透到活細(xì)胞的細(xì)胞膜上。 [Hoechst33342，33258] 它與DNA的腺嘌呤胸苷部分特異性結(jié)合。 它是一種顏料，可以滲透到活細(xì)胞的細(xì)胞膜上并染色活細(xì)胞的DNA。

Q2：細(xì)胞染料的激發(fā)波長和發(fā)射波長是多少。

A2：

Q3如何使用DAPI進(jìn)行核染色？

A3:有以下使用情況報(bào)告示例。制備DAPI儲(chǔ)備溶液時(shí)要用水（難溶于PBS）。 但是，那些溶解在水中的物質(zhì)不適合長期儲(chǔ)存。 對于長期存儲(chǔ)，請使用解決方案類型產(chǎn)品-Cellstain?-DAPI解決方案（貨號：D523），具有更高的解決方案穩(wěn)定性。使用時(shí)，用緩沖液或有機(jī)溶劑將儲(chǔ)備溶液稀釋至所需濃度。 [使用DAPI進(jìn)行細(xì)胞染色的示例] 包含實(shí)體瘤或簇的樣品的DAPI染色示例（參考文獻(xiàn)3） 1）用0.02％胰蛋白酶-EDTA處理，在37°C下孵育30分鐘，以1,500 rpm離心5分鐘，然后沖洗上清液。 2）在-20°C下用50％甲醇（也可以使用乙醇）固定后，以1,500 rpm離心5分鐘以除去上清液。 3）在-20℃下用30％甲醇洗滌后，以1,500rpm離心5分鐘以除去上清液。 4）用0.2 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌后，以1,500 rpm離心5分鐘以除去上清液。 5）每106個(gè)細(xì)胞添加0.2 mL的RNase的0.2 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）（pH 7.2）（1 mg / mL），并在37°C下孵育30分鐘。 6）用0.2 M磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌后，以1,500 rpm離心5分鐘以除去上清液。 7）加入10 mL 1μg/ mL DAPI溶液，并在黑暗中于4°C染色2小時(shí)。 [使用DAPI進(jìn)行細(xì)胞染色的例子]Vollenweider等人在磷酸化因子激活的殺傷（LAK）細(xì)胞的細(xì)胞增殖試驗(yàn)中。 使用熒光打印機(jī)執(zhí)行DAPI染色并進(jìn)行測量（參考2）。 那時(shí)，請使用0.1 mg / mL的水溶液和1μg/ mL的甲醇溶液。 使用每孔100μL進(jìn)行熒光染色。