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Nucleolus Bright Green試劑貨號：N511 核仁熒光染色試劑-綠色 Nucleolus Bright Green 商品信息 儲存條件：避光，在冷暗處保存 運(yùn)輸條件：室溫 選擇規(guī)格： 60 nmol

產(chǎn)品概述

Nucleolus Bright是一種選擇性與RNA結(jié)合并產(chǎn)生熒光的小分子熒光染料，只需在固定細(xì)胞中加入試劑即可成像。雖然Nucleolus Bright也會和在核仁以外存在的RNA反應(yīng)，不過核仁作為細(xì)胞內(nèi)RNA最多存在rRNA的產(chǎn)生場所，熒光尤為強(qiáng)烈。

成像時，通過與核染色試劑DAPI[產(chǎn)品貨號：D523]共染色，可以更清楚地確認(rèn)核仁。有關(guān)詳細(xì)信息，請參閱使用說明書中的實(shí)驗(yàn)例。

原理

核仁是不帶膜的核內(nèi)結(jié)構(gòu)體，也是核糖體生物合成的起點(diǎn)。核仁中存在許多核糖體RNA(rRNA)，并且是 rRNA基因轉(zhuǎn)錄以及合成加工的場所。由于蛋白質(zhì)合成的早期階段在核仁中進(jìn)行，因此核仁的變化被認(rèn)為與多種細(xì)胞活動有關(guān)。核仁的形態(tài)變化已被公認(rèn)為判斷癌癥的指標(biāo)之一，近年來也有一系列的報道論述了核仁應(yīng)激與DNA損傷、自噬、病毒感染和細(xì)胞衰老的關(guān)系，因此核仁在這些方面的研究也受到越來越多的關(guān)注。

核仁染色試劑的比較

最大激發(fā)波長

最大發(fā)射波長

MeOH固定后染色

PFA固定后染色

活細(xì)胞染色

Nucleolus Bright Green

513 nm

538 nm

〇

〇

△※

Nucleolus Bright Red

537 nm

605 nm

〇

〇

△※

※希望通過活細(xì)胞進(jìn)行評價時，請咨詢公司技術(shù)支持。

產(chǎn)品特點(diǎn)

特點(diǎn)1：清晰地觀察核仁

用4％ PFA或MeOH固定HeLa細(xì)胞后，用PBS洗凈后用1％ Triton X-100進(jìn)行破膜處理，加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色

試劑 (DAPI) 并培養(yǎng)，然后用共聚焦熒光顯微鏡觀察。

結(jié)果證實(shí)DAPI染色的細(xì)胞核內(nèi) (藍(lán)色)有數(shù)個核仁存在。

<染色條件>

?PFA 固定

細(xì)胞在4％PFA室溫下浸泡5 min，再用Triton X-100在室溫下浸泡20 min，加入各種熒光探針后培養(yǎng)5 min。

?MeOH 固定

細(xì)胞在冷的MeOH中浸泡1 min，再用Triton X-100在室溫下浸泡20 min，加入各種熒光探針后培養(yǎng)5 min。

<檢測條件>

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

特點(diǎn)2：核仁定位

用4％PFA固定WI-38細(xì)胞后，用抗Fibrillarin一抗和熒光標(biāo)記的二抗免疫染色，并加入Nucleolus Bright Green或Red和核染色試劑

(DAPI) ，培養(yǎng)后，用落射式熒光顯微鏡 (Keyence，BZ-X710) 觀察。

結(jié)果證實(shí)Nucleolus Bright Green和Nucleolus Bright Red與核仁標(biāo)記物(Dense Fibrillar Component)的染色部位一致。

＜檢測條件＞

Nucleolus Bright Green：Ex: 450-490 nm / Em: 500-550 nm

Nucleolus Bright Red：Ex: 533-548 nm / Em: 570-640 nm

DAPI：Ex: 340-380 nm / Em: 435-485 nm

Anti-Fibrillarin 抗體：Ex: 590-650 nm / Em: 668-733 nm

特點(diǎn):3：與核仁相關(guān)的領(lǐng)域的報告示例

相關(guān)領(lǐng)域

概要

文獻(xiàn)

評論(衰老）

關(guān)于各種參與細(xì)胞功能的核仁， 包括與癌癥和早老癥的已知關(guān)系、 特別是關(guān)于衰老的核仁功能。

V. Tiku, A. Antebi, “Nucleolar Function in Lifespan Regulation.”, Trends Cell Biol., 2018, 28(8), 662.

細(xì)胞衰老

由于與抑制衰老有關(guān)的蛋白質(zhì)缺損、 核仁數(shù)量的減少和核仁總面積的加。

H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep.,2017, 18(9), 2148.

細(xì)胞衰老

由于rRNA加工因子的枯竭導(dǎo)致 核仁肥大化， 同時SA-βGal和p16表達(dá)增加。

K. Nishimura, T. Kumazawa, T. Kuroda, N. Katagiri, M. Tsuchiya, N. Goto, R. Furumai, A. Murayama, J. Yanagisawa, K. Kimura, “Perturbation of ribosome biogenesis drives cells into senescence through 5S RNP-mediated p53 activation.”, Cell Rep., 2015, 10(8), 1310.

自噬

通過抑制RNA聚合酶的轉(zhuǎn)錄， 確認(rèn)自噬的誘導(dǎo)和核仁的形狀變化。

N. Katagiri, T. Kuroda, H. Kishimoto, Y. Hayashi, T. Kumazawa and K. Kimura, “The nucleolar protein nucleophosmin is essential for autophagy induced by inhibiting Pol I transcription”, Scientific Reports, 2015, 8903, DOI: 10.1038/srep08903.

衰老細(xì)胞的評價例

將不同傳代數(shù)的WI-38細(xì)胞用4％ PFA固定后，用PBS洗凈并用1％ Triton X-100進(jìn)行破膜處理，然后加入Nucleolus Bright Green或

Red和核染色試劑 (DAPI)，培養(yǎng)后用共聚焦熒光顯微鏡觀察。

結(jié)果證實(shí)第3代細(xì)胞 (P3) 中的一個細(xì)胞核內(nèi)存在多個核仁，而第18代細(xì)胞 (P18) 中核仁變大并成為一體。

<染色條件>

細(xì)胞在4％ PFA室溫下浸泡5 min，再用Triton X-100在室溫下浸泡20 min，加入各種熒光探針后培養(yǎng)5 min。

＜檢測條件＞

Nucleolus Bright Green Ex: 488 nm / Em: 500-600 nm

Nucleolus Bright Red Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm

DAPI Ex: 405 nm / Em: 450-495 nm

產(chǎn)品實(shí)驗(yàn)例

實(shí)驗(yàn)例：通過共聚焦定量細(xì)胞成像儀進(jìn)行定量分析

使用共聚焦定量細(xì)胞成像儀 (橫河電機(jī)株式會社 CQ1)對衰老細(xì)胞的定量分析。

將傳代數(shù)不同的WI-38細(xì)胞固定后，分別用Nucleolus Bright Green和DAPI染色核仁，并用共聚焦定量細(xì)胞成像儀進(jìn)行定量分析

通過圖像對核仁進(jìn)行分析

用共聚焦定量細(xì)胞成像儀在405nm處拍攝細(xì)胞核圖像，在488nm處拍攝核仁體像，通過分析軟件Cell Pathfinder識別各個細(xì)胞核內(nèi)的核仁，并計算出其數(shù)量。

橫河電機(jī)CQ1拍攝條件

使用板：96孔板

物鏡：40倍

激發(fā)波長：

405nm（DAPI）：藍(lán)色

488nm（Nucleolus Bright Green）：綠色

視野：16視野

<解析圖像>

藍(lán)框線：核

紅框線：核仁

核仁數(shù)分析

在傳代數(shù)較多的細(xì)胞中，得到了一個細(xì)胞核中只有一個核仁的比例增加，而兩個及以上核仁的比例減少的結(jié)果。該結(jié)果與下述論文中衰老的WI-38細(xì)胞中核仁數(shù)的減少(論文中的Table3)^*1，以及通過SETD8敲低誘導(dǎo)衰老的細(xì)胞核仁的變化(論文中的Figure4D)^*2得到了相同的結(jié)果。

*1 P. M. Bemiller, L. Lee, “Nucleolar changes in senescing WI-38 cells”, Mech. Ageing Dev., 1978, 8 , 417.

*2 H. Tanaka, S. Takebayashi, A. Sakamoto, T. Igata, Y. Nakatsu, N. Saitoh, S. Hino, M. Nakao, “The SETD8/PR-Set7 Methyltransferase Functions as a Barrier to Prevent Senescence-Associated Metabolic Remodeling.”, Cell Rep., 2017, 18(9), 2148.

熒光特性

常見問題Q&A

Q1：可以染色活細(xì)胞嗎？

A1：本試劑建議用于固定細(xì)胞染色，不建議用活細(xì)胞染色。如果您想用活細(xì)胞染色，請聯(lián)系我們的技術(shù)支持。