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原代肌腱細(xì)胞轉(zhuǎn)染siRNA

2023-04-21

siRNA轉(zhuǎn)染步驟:

1、合成siRNA時(shí)請(qǐng)帶熒光,若siRNA不帶熒光、請(qǐng)使用熒光對(duì)照,方便查看轉(zhuǎn)染效率

2、siRNA濃度:20uM/L

3、siRNA和轉(zhuǎn)染試劑復(fù)合物制備:siRNA 8ul和轉(zhuǎn)染試劑8ul,吹打混勻室溫靜置15分鐘,無(wú)需另外加入任何試劑稀釋

4、細(xì)胞轉(zhuǎn)染前狀態(tài):拍明場(chǎng)細(xì)胞照片留存

5、貼壁細(xì)胞鋪板:6孔板完全培養(yǎng)基2ml、培養(yǎng)基中不加雙抗,細(xì)胞密度:60%左右(不同細(xì)胞,按48小時(shí)生長(zhǎng)到90%,往前推算細(xì)胞鋪板密度)

6、轉(zhuǎn)染:將復(fù)合物加入輕搖混勻、培養(yǎng)箱培養(yǎng)

7、換液:轉(zhuǎn)染24小時(shí)后培養(yǎng)基換液

8、轉(zhuǎn)染效率:轉(zhuǎn)染48小時(shí)后拍熒光照片,查看轉(zhuǎn)染效率

9、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞狀態(tài):拍明場(chǎng)細(xì)胞狀態(tài)照片

10、檢測(cè):總計(jì)轉(zhuǎn)染48小時(shí)后提取RNA或蛋白檢測(cè)


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