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品牌: biomedworld 公司: 沃登醫(yī)學(xué)

提供商： 沃登醫(yī)學(xué) 服務(wù)名稱： ELISA

產(chǎn)品詳情請(qǐng)聯(lián)系金山科研平臺(tái)微信：jinshanbio
一、ELISA服務(wù)介紹ELISA(Enzyme-linked Immunosorbnent assay)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)是利用蛋白和聚苯乙烯表面疏水吸附的特性，將抗原-抗體特異性結(jié)合反應(yīng)固定于固相載體表面進(jìn)行，同時(shí)結(jié)合酶對(duì)底物的高效率催化作用而產(chǎn)生高靈敏的檢測(cè)效果。ELISA實(shí)驗(yàn)用于定量測(cè)定，可以有效檢測(cè)出濃度為pg/L級(jí)的待測(cè)物。ELISA實(shí)驗(yàn)是一種靈敏高效的體外檢測(cè)手段，廣泛用于研究和體外診斷。ELISA實(shí)驗(yàn)原理圖二、ELISA服務(wù)內(nèi)容方法一：用于檢測(cè)未知抗原的雙抗體夾心法：1.包被：用0.05 M pH9的碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10 μg/mL，在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1 mL，4°C過(guò)夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘；2.加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1 mL于上述已包被之反應(yīng)孔中，置于37℃孵育1小時(shí)，然后洗滌（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）；3.加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1 mL，37°C孵育0.5～1小時(shí)，洗滌；4.加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1 mL，37℃ 10～30分鐘；5.終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2 M硫酸0.05 mL；6.結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果，反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示；也可測(cè)OD值，在ELISA檢測(cè)儀上，于450 nm（若以ABTS顯色，則410 nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。方法二：用于檢測(cè)未知抗體的間接法：用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10 μg/mL，每孔加0.1ml，4℃過(guò)夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1 mL于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃孵育1小時(shí)，洗滌。（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1 mL，37°C孵育30～60分鐘，洗滌，最后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。三、ELISA服務(wù)說(shuō)明1. 本實(shí)驗(yàn)可以檢測(cè)以下樣本：1) 血清：在室溫自然凝固后，離心20分鐘（2000-3000 rpm），收集上清。2) 血漿：根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇EDTA，檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑，混合10-20分鐘后離心20分鐘（2000-3000 rpm），取上清進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。3) 尿液、腦脊液等：使用無(wú)菌收集管，離心20分鐘（2000-3000 rpm）。仔細(xì)收集上清完成實(shí)驗(yàn)。4) 細(xì)胞培養(yǎng)上清：如果分泌成分在培養(yǎng)基中，可以直接檢測(cè)上清。如果待測(cè)是細(xì)胞，應(yīng)仔細(xì)收集細(xì)胞，通過(guò)反復(fù)凍融釋放出細(xì)胞內(nèi)成分，離心取上清進(jìn)行檢測(cè)。5) 組織標(biāo)本：切取標(biāo)本后稱重，加入一定量的PBS或組織蛋白萃取試劑，并加入蛋白酶抑制劑，充分勻漿。離心20分鐘左右（ 2000-3000 rpm），收集上清置于-20℃或-80℃ 保存。如有必要，可將樣品濃縮干燥，分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用。2.樣本保存及傳遞：1）3天內(nèi)測(cè)定的標(biāo)本可放置在4°C，否則需低溫凍存運(yùn)輸。2）周期批量收集的樣本即使分裝后放在-20°C或-80°C中保存，避免反復(fù)凍融。注：2-8 °C可保存 72小時(shí)，-20 °C 可保存1個(gè)月。-80 °C可保存6個(gè)月。3.實(shí)驗(yàn)周期：實(shí)驗(yàn)周期一般在收到樣品后7-14個(gè)工作日；4.若另有疑問(wèn)歡迎向本公司咨詢，我們將竭誠(chéng)為您服務(wù)。四、質(zhì)量承諾1.權(quán)威的ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告及結(jié)果分析（本公司承諾檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確、客觀、可信，但不保證得到某一特定結(jié)果。）；2.真實(shí)的原始實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)；3.詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)步驟。