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品牌: biomedworld 公司: 沃登醫(yī)學(xué)

提供商： 沃登醫(yī)學(xué) 服務(wù)名稱(chēng)： RNAi

產(chǎn)品詳情請(qǐng)聯(lián)系金山科研平臺(tái)微信：jinshanbio
RNAi一、RNAi服務(wù)介紹研究表明，將與mRNA同源的正義RNA和反義RNA組成的雙鏈RNA（dsRNA）導(dǎo)入細(xì)胞，可以使mRNA發(fā)生特異性的降解，從而抑制其相應(yīng)基因的表達(dá)。這種轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制（Post-transcriptional gene silencing, PTGS）被稱(chēng)為RNA干擾（RNAi）。由于RNAi具有高度的序列專(zhuān)一性，可以特異地使特定基因沉默，獲得功能喪失或降低突變，因此RNAi可以作為一種強(qiáng)有力的研究工具，用于功能基因組的研究。我們應(yīng)用國(guó)外知名公司的RNAi Designer平臺(tái)，可對(duì)靶基因序列進(jìn)行干擾位置效應(yīng)評(píng)價(jià)和序列同源型分析，完成siRNA/miRNA多種序列的的設(shè)計(jì)，并提供從siRNA合成、RNAi載體構(gòu)建到RNAi功能驗(yàn)證等全面的RNAi解決方案。二、服務(wù)內(nèi)容：1、siRNA合成：對(duì)于瞬時(shí)基因沉默實(shí)驗(yàn)，化學(xué)合成siRNA的方法操作簡(jiǎn)便，容易獲得高水平的瞬時(shí)沉默效果，特異性強(qiáng)。我們通過(guò)嚴(yán)格設(shè)計(jì)來(lái)增強(qiáng)siRNA的專(zhuān)一性；針對(duì)某靶基因設(shè)計(jì)的3條siRNA可保證其中兩條的Knockdown效率達(dá)到75％（染效率大于80％的情況下）。實(shí)驗(yàn)流程：1）根據(jù)序列信息，進(jìn)行化學(xué)合成；2）純化及定量；3）凍干處理；4）細(xì)胞轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；5）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；6）RT-PCR或Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后某一時(shí)間點(diǎn)靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。2、質(zhì)粒載體shRNA的構(gòu)建：構(gòu)建shRNA表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)shRNA在細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)，能夠彌補(bǔ)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染持續(xù)時(shí)間短的不足。實(shí)驗(yàn)流程：1）mRNA序列分析；2）引物設(shè)計(jì)及合成；3）單鏈互補(bǔ)引物退火；4）將片段克隆至載體；5）測(cè)序以確保插入序列正確性；6）向客戶提交測(cè)序結(jié)果與實(shí)驗(yàn)方法報(bào)告單。3、microRNA干擾載體構(gòu)建：RNAi載體表達(dá)可以穩(wěn)定地研究基因功能，載體在細(xì)胞種持續(xù)抑制靶基因的表達(dá)可達(dá)數(shù)星期甚至更久。 RNAi載體利用細(xì)胞內(nèi)源性的miRNA加工機(jī)制，相比傳統(tǒng)shRNA載體可更高效地表達(dá)RNA發(fā)夾結(jié)構(gòu)。每個(gè)基因設(shè)計(jì)的4條序列，我們保證至少有2條可以達(dá)到至少70％轉(zhuǎn)錄水平的Knockdown效率（在轉(zhuǎn)染效率大于80％的情況下）。實(shí)驗(yàn)流程：1）針對(duì)特定基因，設(shè)計(jì)micro RNAi序列，合成該序列并退火生成雙鏈DNA；2）將DNA與載體連接并轉(zhuǎn)化；3）測(cè)序驗(yàn)證miRNA序列的正確性；4）細(xì)胞轉(zhuǎn)染預(yù)實(shí)驗(yàn)，優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件；5）瞬時(shí)轉(zhuǎn)染或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；6）RT-PCR或Western blot檢測(cè)轉(zhuǎn)染后某一時(shí)間點(diǎn)靶基因的RNA水平或蛋白水平的變化。4、RNAi干擾效果檢測(cè)：應(yīng)用RT-PCR方法檢測(cè)mRNA水平的基因敲除效果；通過(guò)Western blot方法檢測(cè)蛋白水平的基因敲除效果。三、服務(wù)說(shuō)明1、siRNA合成客戶提供：1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）以及技術(shù)要求（包括OD和nmols的精確數(shù)量、純化類(lèi)型和修飾要求等）2）細(xì)胞株和詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟3）一抗（如果需要Western blot檢測(cè)）注：普通siRNA：均有HPLC純化，100％除去尚未配對(duì)的單鏈 ；化學(xué)修飾siRNA：利用修飾以提高siRNA在血清和培養(yǎng)基種的穩(wěn)定性；熒光標(biāo)記siRNA；siRNA對(duì)照：普通陰性對(duì)照、熒光標(biāo)記的陰性對(duì)照（易觀察，可觀察轉(zhuǎn)染效率）和siRNA陽(yáng)性對(duì)照（作為一個(gè)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)檢查，確保在您的實(shí)驗(yàn)方法是可靠的；2、質(zhì)粒載體shRNA的構(gòu)建客戶提供：待研究mRNA序列信息。3、microRNA干擾載體構(gòu)建客戶提供：1）目的基因的Accession Number（Human、Mouse或Rat種屬）2）細(xì)胞株和詳細(xì)的細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟3）一抗抗體（如果需要Western blot檢測(cè)）4、服務(wù)價(jià)格與周期：四、質(zhì)量承諾：1、siRNA合成：1）轉(zhuǎn)染效率分析；2）Knockdown結(jié)果。針對(duì)靶基因設(shè)計(jì)的3條siRNA可保證其中2條的Knockdown效率達(dá)到75％（在轉(zhuǎn)染效率大于80％的情況下）。2、質(zhì)粒載體shRNA的構(gòu)建：1）陽(yáng)性克隆質(zhì)粒；2）陽(yáng)性克隆甘油菌；3）測(cè)序報(bào)告以及實(shí)驗(yàn)方法報(bào)告。3、microRNA干擾載體構(gòu)建：1）構(gòu)建好的表達(dá)載體和相應(yīng)的甘油菌；贈(zèng)送陰性對(duì)照甘油菌；2）測(cè)序報(bào)告；3）轉(zhuǎn)染效率分析；4）Knockdown結(jié)果。針對(duì)某靶基因設(shè)計(jì)的3條miRNA序列，在轉(zhuǎn)染效率 > 80％的前提下，我們保證至少有1個(gè)克隆可以達(dá)到70％轉(zhuǎn)錄水平的沉默效率服務(wù)流程。