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品牌: genelb 公司: 上海晶萊生物技術(shù)有限公司

提供商： 晶萊生物 服務(wù)名稱： SILAC代謝標(biāo)記定量實(shí)驗(yàn)服務(wù) 規(guī)格： 實(shí)驗(yàn)

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實(shí)驗(yàn)技術(shù)簡介：SILAC的基本原理是分別用天然同位素(輕型)或穩(wěn)定同位素 (重型)標(biāo)記的必需氨基酸取代細(xì)胞培養(yǎng)基中相應(yīng)氨基酸，細(xì)胞經(jīng)5-6個(gè)倍增周期后，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸完全摻入到細(xì)胞新合成的蛋白質(zhì)中替代了原有氨基 酸。不同標(biāo)記細(xì)胞的裂解蛋白按細(xì)胞數(shù)或蛋白量等比例混合，經(jīng)分離、純化后進(jìn)行質(zhì)譜鑒定，根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜圖中兩個(gè)同位素型肽段的面積比較進(jìn)行相對(duì)定量。屬于體 內(nèi)代謝標(biāo)記法。實(shí)驗(yàn)操作流程：1、蛋白提取和樣品制備2、標(biāo)記效率測試3、樣品混合4、SDS-PAGE分級(jí)5、酶解6、質(zhì)譜鑒定7、軟件分析8、定性定量蛋白質(zhì)組結(jié)果9、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)挖掘和統(tǒng)計(jì)分析實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：客戶提供：1、蛋白質(zhì)提取物：濃度>1μg/μl，蛋白質(zhì)總量 >300μg2、細(xì)胞：通過細(xì)胞計(jì)數(shù)取不少于2×10⁶個(gè)細(xì)胞于EP管，加入0.5ml生理鹽水或蛋白保護(hù)劑，混勻后保存于冰箱（-80℃，避免反復(fù)凍融）交付標(biāo)準(zhǔn)：1、蛋白質(zhì)鑒定和SILAC定量分析結(jié)果；2、顧客指定蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖；3、SILAC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。其他：1、SILAC是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，穩(wěn)定同位素標(biāo)記的氨基酸與天然氨基酸化學(xué)性質(zhì)基本相同，所標(biāo)記的細(xì)胞和未標(biāo)記細(xì)胞在生物學(xué)行為上幾乎沒有差異，標(biāo)記效率可高達(dá)100％。2、采用質(zhì)譜定量，定量結(jié)果準(zhǔn)確且批次變異小、重復(fù)性好。3、體內(nèi)代謝標(biāo)記與SDS-PAGE或色譜分離技術(shù)相結(jié)合，兼容疏水性蛋白和偏堿性蛋白，不受蛋白性質(zhì)限制。4、多個(gè)樣品混合后同時(shí)進(jìn)行分離、酶切和鑒定，后續(xù)實(shí)驗(yàn)對(duì)樣品的影響一致，減少了實(shí)驗(yàn)操作和儀器設(shè)備產(chǎn)生的影響。5、由于該技術(shù)屬于體內(nèi)標(biāo)記，標(biāo)記效果穩(wěn)定，其標(biāo)記效率不受裂解液的影響，不僅適合于進(jìn)行全細(xì)胞蛋白的分析，還適合于膜蛋白的鑒定和定量。6、與化學(xué)標(biāo)記相比，SILAC方法蛋白需要量明顯減少，通常每個(gè)樣品只需要幾十微克的蛋白量。7、活體標(biāo)記，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。8、只適用于活體培養(yǎng)的細(xì)胞，對(duì)于生物醫(yī)學(xué)研究中常用的組織樣品，體液樣品等無法分析，對(duì)于動(dòng)物模型的標(biāo)記成本太大，無法實(shí)現(xiàn)。與體外標(biāo)記技術(shù)相比，SILAC屬于體內(nèi)標(biāo)記，具有以下技術(shù)優(yōu)勢1、高通量，可同時(shí)鑒定并定量數(shù)百至數(shù)千種蛋白質(zhì)； 2、定量精確，降低由于樣品制備不同而造成的實(shí)驗(yàn)差異； 3、線性定量范圍廣； 4、靈敏度更高，蛋白質(zhì)需要量明顯減少；5、標(biāo)記采用的是體內(nèi)標(biāo)記技術(shù)，更接近樣品真實(shí)狀態(tài)。SILAC技術(shù)服務(wù)內(nèi)容1、細(xì)胞同位素標(biāo)記；3、SDS-PAGE分離；4、胰酶酶切后液相分離和質(zhì)譜分析； 5、數(shù)據(jù)庫檢索及蛋白質(zhì)定量分析；6、差異蛋白的生物信息學(xué)分析7、實(shí)驗(yàn)報(bào)告提交。實(shí)驗(yàn)服務(wù)報(bào)告內(nèi)容1、蛋白定鑒定和SILAC定量分析結(jié)果； 2 、顧客指定蛋白質(zhì)對(duì)應(yīng)的質(zhì)譜峰圖； 3、SILAC實(shí)驗(yàn)完整的實(shí)驗(yàn)步驟、使用儀器、軟件檢索參數(shù)等。技術(shù)服務(wù)優(yōu)勢 1、靈敏度高，檢測限低，可檢測出低豐度蛋白； 2、分離能力強(qiáng)，分析范圍廣，iTRAQ可以對(duì)任何類型的蛋白質(zhì)進(jìn)行分離鑒定，包括高分子量蛋白質(zhì)、酸性蛋白和堿性蛋白，膜蛋白和不溶性蛋白； 3、高通量：同時(shí)對(duì)8個(gè)樣本進(jìn)行分析，提高了實(shí)驗(yàn)通量，可同時(shí)對(duì)多個(gè)時(shí)間點(diǎn)或不同處理的蛋白質(zhì)進(jìn)行分析； 4、結(jié)果可靠：定性與定量分析結(jié)果更加可靠； 5、自動(dòng)化程度高：液相與質(zhì)譜連用，自動(dòng)化操作，分析速度快，分離效果好。收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：歡迎咨詢?cè)斦劊覀儠?huì)根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請(qǐng)瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容，或來電咨詢！做實(shí)驗(yàn)，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！【平臺(tái)項(xiàng)目開展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實(shí)驗(yàn)，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)，芯片類實(shí)驗(yàn)，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請(qǐng)指導(dǎo)、SCI、核心期刊等服務(wù)。全國統(tǒng)一咨詢服務(wù)熱線:4008-766-085【上海公司】上海市嘉定區(qū)槎溪路788弄1號(hào)17層【北京公司】北京市大興區(qū)科創(chuàng)十四街嘉捷·BDA企業(yè)匯16號(hào)樓三層【長沙公司】長沙市高新區(qū)麓谷大道627號(hào)新長海中心B2-403室 【技術(shù)咨詢】18500539084【公司郵箱】lab-china@genelb.cn【全國業(yè)務(wù)咨詢】北京：18810244671 上海：15800916241 長沙：15616228964 武漢：15201856307 西安：13651049420 廣州：18810244571 其他地區(qū)：13818286017【晶萊生物】已開展了數(shù)千個(gè)實(shí)驗(yàn)外包項(xiàng)目。我們專注于醫(yī)學(xué)課題研究，已從課題申請(qǐng)、方案設(shè)計(jì)、試劑采購、模型構(gòu)造、標(biāo)本檢測、數(shù)據(jù)分析、以及對(duì)SCI撰寫與發(fā)表的支持，各個(gè)環(huán)節(jié)積累了數(shù)千個(gè)成功案例經(jīng)驗(yàn)，為數(shù)千個(gè)來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)信息請(qǐng)咨詢晶萊生物