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品牌: genelb 公司: 上海晶萊生物技術(shù)有限公司

品牌： Geneline 貨號： - 規(guī)格： 真核表達(dá)載體構(gòu)建實(shí)驗(yàn)服務(wù)

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一、服務(wù)介紹 分子克隆是在分子水平上提供一種純化和擴(kuò)增特定DNA片段的方法。常含有目的基因，用體外重組方法將它們插入克隆載體，形成重組克隆載體，通過轉(zhuǎn)化與轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式，引入適合的寄主體內(nèi)得到復(fù)制與擴(kuò)增，然后再從篩選的寄主細(xì)胞內(nèi)分離提純所需的克隆載體，可以得到插入DNA的許多拷貝，從而獲得目的基因的擴(kuò)增。二、實(shí)驗(yàn)原理 外源DNA與載體分子的連接就是DNA重組，這樣重新組合的DNA叫做重組體或重組子。重組的DNA分子是在DNA連接酶的作用下,有Mg2+、ATP存在的連接緩沖系統(tǒng)中，將分別經(jīng)酶切的載體分子與外源DNA分子進(jìn)行連接。DNA連接酶有兩種：T4噬菌體DNA連接酶和大腸桿菌DNA連接酶。兩種DNA連接酶都有將兩個帶有相同粘性末端的DNA分子連在一起的功能，而且T4噬菌體DNA連接酶還有—種大腸桿菌連接酶沒有的特性，即能使兩個平末端的雙鏈DNA分子連接起來。但這種連接的效率比粘性末端的連接效率低，一般可通過提高T4噬菌體DNA連接酶濃度或增加DNA濃度來提高平末端的連接效率。 T4噬菌體DNA連接酶催化DNA連接反應(yīng)分為3步：首先，T4DNA連接酶與輔助因子ATP形成酶—AMP復(fù)合物；然后，酶—AMP復(fù)合物再結(jié)合到具有5’磷酸基和3’羥基切口的DNA上，使DNA腺苷化；最后產(chǎn)生一個新的磷酸二酯鍵，把切口封起來。 DNA重組的方法主要有粘端連接法和平端連接法，為了防止載體本身的自連，可以通過(牛小腸堿性磷酸酶)CIP處理克服。 連接反應(yīng)的溫度在37℃時有利于連接酶的活性.但是在這個溫度下，粘性末端的氫鍵結(jié)合是不穩(wěn)定的。因此人們找到了一個折中溫度，即12-16℃，連接12-16h(過夜)，這樣既可最大限度地發(fā)揮連接酶的活性，又兼顧到短暫配對結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。三、實(shí)驗(yàn)流程

目的DNA的擴(kuò)增和純化；連接反應(yīng)；電泳檢測連接產(chǎn)物。

四、客戶提供樣本DNA，基因序列，試劑盒。五、公司提供構(gòu)建好的載體，電泳膠圖，測序結(jié)果。收費(fèi)標(biāo)準(zhǔn)/服務(wù)周期/提供結(jié)果：歡迎咨詢詳談，我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細(xì)的服務(wù)協(xié)議。更多實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容，或來電咨詢！做實(shí)驗(yàn)，找晶萊！您的科研生涯，我們一路相伴！【平臺項(xiàng)目開展范圍】慢病毒，腺病毒，RNAi類，分子生物實(shí)驗(yàn)，病理實(shí)驗(yàn)，免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，動物實(shí)驗(yàn)，蛋白組學(xué)實(shí)驗(yàn)，芯片類實(shí)驗(yàn)，并為廣大客戶朋友們提供課題設(shè)計(jì)指導(dǎo)、基金申請指導(dǎo)、SCI、核心期刊等服務(wù)。全國統(tǒng)一咨詢服務(wù)熱線:4008-766-085【上海公司】上海市嘉定區(qū)槎溪路788弄1號17層【北京公司】北京市大興區(qū)科創(chuàng)十四街嘉捷·BDA企業(yè)匯16號樓三層【長沙公司】長沙市高新區(qū)麓谷大道627號新長海中心B2-403室 【技術(shù)咨詢】18500539084【公司郵箱】lab-china@genelb.cn【全國業(yè)務(wù)咨詢】北京：18810244671 上海：15800916241 長沙：15616228964 武漢：15201856307 西安：13651049420 廣州：18810244571 其他地區(qū)：13818286017【晶萊生物】已開展了數(shù)千個實(shí)驗(yàn)外包項(xiàng)目。我們專注于醫(yī)學(xué)課題研究，已從課題申請、方案設(shè)計(jì)、試劑采購、模型構(gòu)造、標(biāo)本檢測、數(shù)據(jù)分析、以及對SCI撰寫與發(fā)表的支持，各個環(huán)節(jié)積累了數(shù)千個成功案例經(jīng)驗(yàn)，為數(shù)千個來自臨床的科研工作者解決了大量的科研問題。更多相關(guān)實(shí)驗(yàn)服務(wù)信息請咨詢晶萊生物