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金山科研平臺(tái):本定點(diǎn)突變?cè)噭┖惺腔赑CR原理向目的DNA片段(一般為質(zhì)粒)中引入堿基的點(diǎn)突變,多個(gè)鄰近密碼子的突變,單個(gè)或多個(gè)鄰近密碼子的缺失(deletion)或插入(insertion)等。一般宿主菌培養(yǎng)擴(kuò)增的質(zhì)粒DNA是甲基化的,PCR擴(kuò)增新合成的DNA是非甲基化的。首先以待突變的甲基化質(zhì)粒為模板,利用超快高保真的SuperPfu聚合酶實(shí)現(xiàn)突變質(zhì)粒的合成(非甲基化,包含突變點(diǎn),且有兩個(gè)缺刻點(diǎn)nick點(diǎn)),再利用Dpn I酶選擇性降解甲基化的模板質(zhì)粒 ,剩下的新合成非甲基化的突變質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌后,質(zhì)粒中有兩個(gè)nick位點(diǎn)可以被大腸桿菌修復(fù),得到的克隆就會(huì)含有預(yù)期的突變質(zhì)粒了。一般可以產(chǎn)生大于90%的突變效率。特點(diǎn):1、簡單,一個(gè)PCR管中完成所有操作,速度最快。2、采用部分重疊引物設(shè)計(jì),使PCR呈指數(shù)擴(kuò)增,擴(kuò)增產(chǎn)物凝膠電泳可見增加成功率。3、效率高,使用Dpn I去除非突變模板,突變效率高達(dá)90%;不需要使用特殊感受態(tài)細(xì)胞降解非突變質(zhì)粒。4、采用分子進(jìn)化改造的SuperPfu可以提供4倍-6倍于pfu的擴(kuò)增速率提高和3倍于pfu的超高保真性。儲(chǔ)存:-20℃ 保存,有效期12個(gè)月。由于試劑盒中提供的反應(yīng)緩沖液及dNTP等成份是為反應(yīng)專門優(yōu)化的,所以不要用其它的反應(yīng)緩沖液及dNTP等代替。具體產(chǎn)品折扣價(jià)請(qǐng)郵件或電話咨詢,想了解更多信息,也可登錄公司官網(wǎng):www.genenode.com 溫馨提示:不可用于臨床治療。
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