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CRISPR-Cas 技術(shù)是繼鋅指核酸酶（ZFN）、ES 細(xì)胞打靶和 TALEN 等技術(shù)后可用于定點構(gòu)建基因敲除大、小鼠動物的第四種方法，且有效率高、速度快、生殖系轉(zhuǎn)移能力強及簡單經(jīng)濟的特點，在動物模型構(gòu)建的應(yīng)用前景將非常廣闊。簡介： 基因敲除動物模型一直以來是在活體動物上開展基因功能研究、尋找合適藥物作用靶標(biāo)的重要工具。但是傳統(tǒng)的基因敲除方法需要通過復(fù)雜的打靶載體構(gòu)建、ES細(xì)胞篩選、嵌合體小鼠選育等一系列步驟，不僅流程繁瑣、對技術(shù)的要求很高，而且費用大，耗時較長，成功率受到多方面因素的限制。即使對于技術(shù)比較成熟的實驗室，利用傳統(tǒng)技術(shù)構(gòu)建基因敲除大、小鼠一般也需要一年以上。2013 年 1 月份，美國兩個實驗室在《Science》雜志發(fā)表了基于 CRISPR-Cas9 技術(shù)在細(xì)胞系中進(jìn)行基因敲除的新方法，該技術(shù)與以往的技術(shù)不同，是利用靶點特異性的 RNA 將 Cas9 核酸酶帶到基因組上的具體靶點，從而對特定基因位點進(jìn)行切割導(dǎo)致突變。該技術(shù)迅速被運用到基因敲除小鼠和大鼠動物模型的構(gòu)建之中。通過一系列研究，首先證明了通過 RNA 注射的方式將 CRISPR-Cas 系統(tǒng)導(dǎo)入小鼠受精卵比 DNA 注射能更有效的在胚胎中產(chǎn)生定點突變。在此基礎(chǔ)上，又發(fā)現(xiàn)了該方法沒有小鼠遺傳品系的限制，能夠?qū)Υ笃蔚幕蚪M DNA 進(jìn)行刪除，也可以通過同時注射針對不同基因的 RNA 序列達(dá)到在同一只小鼠或大鼠中產(chǎn)生多個基因突變的效果。此外，還證明了利用 CRISPR-Cas 技術(shù)構(gòu)建的基因敲除大鼠模型與傳統(tǒng)方法構(gòu)建的同一基因（肥胖相關(guān) G 蛋白偶聯(lián)受體 Mc4R）突變大鼠相比具有一致的表型。該方法構(gòu)建的基因突變動物具有顯著高于傳統(tǒng)方法的生殖系轉(zhuǎn)移能力，是一種可靠、高效、快速的構(gòu)建敲除動物模型的新方法。