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品牌: wanleibio 公司: 沈陽(yáng)萬(wàn)類(lèi)生物科技有限公司

貨號(hào)： WLA112b 保存條件： 4℃及-20℃ 規(guī)格： 50T

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萬(wàn)類(lèi)生物試劑促銷(xiāo)：抗體5折，部分試劑盒8折！產(chǎn)品名稱(chēng)：免疫共沉淀（Co-IP）試劑盒產(chǎn)品概述：免疫共沉淀（co-immunoprecipitation，Co-IP）是研究蛋白質(zhì)間相互作用的一種常用方法,基本原理是以細(xì)胞內(nèi)源性靶蛋白為誘餌，將靶蛋白抗體與細(xì)胞總蛋白進(jìn)行共孵育，促進(jìn)免疫復(fù)合物的形成；隨后加入能夠與抗體Fc段結(jié)合的prorein A beads，形成“結(jié)合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗體-protein A小珠”復(fù)合物，純化該復(fù)合物后凝膠電泳分離蛋白，應(yīng)用Western blot或者質(zhì)譜技術(shù)鑒定靶蛋白的結(jié)合蛋白。包裝信息：

試劑名稱(chēng)WLA112a（20T）WLA112b（50T）保存條件裂解液20ml50ml-20℃Protein A beads2.4ml6ml4℃試劑 A4ml10ml室溫試劑B150μl300μl室溫蛋白標(biāo)準(zhǔn)品(5mg/ml BSA)50μl100μl-20℃

保存日期：本試劑盒自訂購(gòu)之日起一年內(nèi)有效。注意事項(xiàng)：1. 裂解細(xì)胞時(shí)，為防止蛋白降解，所有的操作盡量在冰上進(jìn)行。2. 測(cè)定蛋白濃度時(shí)，樣品中若含有EDTA、EGTA、DTT、硫酸銨和脂類(lèi)會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。3. 要確保抗體的特異性，即在不表達(dá)抗原的細(xì)胞溶解物中添加抗體后不會(huì)引起共沉淀，確保共沉淀的蛋白是由所加入的抗體沉淀得到的，而并非外源非特異蛋白，單克隆抗體的使用有助于避免污染的發(fā)生。4. Protein A beads離心時(shí)，離心力不易過(guò)高，會(huì)損壞Protein A beads，離心力在3000-5000×g即可。操作流程：1. 除去細(xì)胞培養(yǎng)基，用預(yù)冷的PBS（需自備）洗滌細(xì)胞兩次。2. 加入預(yù)冷的裂解液(見(jiàn)表1)，冰育5min。Wanleibio Co.,Ltd. 400-602-0407 sales@wanleibio.com www.wanleibio.com表1. 不同標(biāo)準(zhǔn)的細(xì)胞培養(yǎng)皿/板中裂解/洗滌緩沖液的建議添加量

培養(yǎng)皿/板的尺寸或表面積裂解/洗滌緩沖液體積100×100 mm500-1000 μl100×60 mm250-500 μl6- 孔板200-400 μl 每孔24- 孔板100-200 μl 每孔

3. 用預(yù)冷的細(xì)胞刮將細(xì)胞從培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶上刮下，把懸液轉(zhuǎn)到1.5ml EP管中，緩慢晃動(dòng)10min。4. 4℃，14000×g離心15min，將上清轉(zhuǎn)移至新的離心管中。5. 準(zhǔn)備Protein A beads，用1ml PBS清洗三次（3000×g離心1min）后保存?zhèn)溆茫瞬襟E可提前準(zhǔn)備。6. 做蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，測(cè)定蛋白濃度。① 配制工作液：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品數(shù)量，按50體積試劑A加1體積試劑B(50：1)配制適量 工作液，充分混勻。② 稀釋標(biāo)準(zhǔn)品：取10μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋到100μl，使終濃度為0.5mg/ml。將標(biāo)準(zhǔn)品按0、1、2、4、 8、12、16、20μl加到96孔板的蛋白標(biāo)準(zhǔn)品孔中，再用PBS補(bǔ)足至20μl。③ 加適當(dāng)體積樣品到96孔板的樣品孔中，再用PBS溶液補(bǔ)足至20μl。④ 向各孔加入200μl工作液，37℃放置30min(也可室溫放置2h)。⑤ 用酶標(biāo)儀測(cè)定A562，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算出蛋白濃度。7. 每1ml總蛋白中加入60μl Protein A beads，以去除非特異性雜蛋白，降低背景。8. 4℃，14000×g離心15min，將上清轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中，去除Protein A beads。9. 用PBS將總蛋白稀釋到約1 μg/μl，如果目的蛋白在細(xì)胞中含量較低，則總蛋白濃度應(yīng)該稍高（如10 μg/μl）。10. 加入2μg抗體到500μl總蛋白中，用搖床緩慢搖動(dòng)抗原抗體混合物，4℃過(guò)夜。11. 加入60μl Protein A beads來(lái)捕捉抗原抗體復(fù)合物，室溫緩慢搖動(dòng)抗原抗體混合物2h。12. 用預(yù)冷 PBS清洗三次（3000×g離心1min），收集瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物，棄上清 。13. 用60μl 2×上樣緩沖液將瓊脂糖珠-抗原抗體復(fù)合物懸起，輕輕混勻，緩沖液的量依據(jù)上樣多少的需要而定（60 μl足夠上三道）。14. 將上樣樣品煮沸5min，以游離抗原，抗體，珠子，3000×g離心1min，收集上清，也可以暫時(shí)于-20℃保存，留待以后電泳，電泳前應(yīng)再次煮沸5min。詳情請(qǐng)致電咨詢(xún)：400-602-0407（轉(zhuǎn)1號(hào)鍵）或登錄公司官網(wǎng)www.wanleibio.cn 溫馨提示：不可用于臨床治療。

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