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品牌: cobioer 公司: 南京科佰生物科技有限公司

提供商： Cobioer 服務(wù)名稱： STR鑒定

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1細(xì)胞遺傳質(zhì)量檢測的重要性很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細(xì)胞來進(jìn)行,這些細(xì)胞可能是從細(xì)胞庫(如美國ATCC,AmericanTypeCultureCollection)得來,也可能是受贈于其它研究人員。據(jù)估計(jì),15-20%的時間里,實(shí)驗(yàn)中所使用的細(xì)胞已經(jīng)不是原來的細(xì)胞系,或者與其它細(xì)胞系發(fā)生了交叉污染。顯然,細(xì)胞系遭到污染、特征鑒別錯誤,將會極大地威脅著基于這些細(xì)胞而發(fā)表的論文的質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此,很多細(xì)胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細(xì)胞系進(jìn)行鑒定,并對細(xì)胞系之間的交叉污染進(jìn)行監(jiān)測。一些機(jī)構(gòu)已經(jīng)認(rèn)識到了交叉污染的問題,如ATCC和FDA,這些機(jī)構(gòu)要求對用于制藥領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)中所使用的材料—諸如細(xì)胞系—應(yīng)該進(jìn)行“身份鑒定”和純度測試。Nature雜志最近也要求報告新的人類胚胎干細(xì)胞系的文章提供STR指紋圖譜數(shù)據(jù)。此外，F(xiàn)DA建議研究人員在培養(yǎng)細(xì)胞的較早階段(細(xì)胞培養(yǎng)第一周)來鑒定細(xì)胞系的身份。細(xì)胞在被凍存前應(yīng)再一次進(jìn)行鑒定;對于活躍生長的細(xì)胞,每兩個月應(yīng)鑒定一次;文獻(xiàn)發(fā)表前也應(yīng)對細(xì)胞系身份進(jìn)行鑒定。如果一個實(shí)驗(yàn)室使用不止一種細(xì)胞系,則應(yīng)在實(shí)驗(yàn)最開始時,就要對所有的細(xì)胞系進(jìn)行鑒定,以便排除交叉污染。2基于STR的方法可以輕松、快速地鑒定細(xì)胞身份細(xì)胞培養(yǎng)中可以使用許多方法對交叉污染進(jìn)行鑒定,如同功酶分析、染色體組分型、人淋巴細(xì)胞抗原(HLA)分型和擴(kuò)增片段長度多態(tài)性(AFLP)的特征分析。但是,比較好的方法是STR圖譜法,在ATCC,STR分析使用的是多重PCR，可以同時擴(kuò)增8個STR位點(diǎn)加1個性別決定位點(diǎn)Amelogenin。每個被分析的人源細(xì)胞系都有其獨(dú)特的DNA重復(fù)模式,因此通過與基礎(chǔ)圖譜進(jìn)行比對,即可對每一批新細(xì)胞系的身份進(jìn)行確證。STR方法防止了ATCC將其6個“錯誤”細(xì)胞系進(jìn)一步傳播出去—因?yàn)榻?jīng)過STR分型后,發(fā)現(xiàn)原本來自女性的細(xì)胞系中存在著Y染色體特異的擴(kuò)增產(chǎn)物。3技術(shù)流程3.1STR位點(diǎn)的選擇為了進(jìn)一步提高鑒定的分辨率，我們除了包含ATCC檢測的8個STR和1個性別決定位點(diǎn)Amelogenin外（表1中藍(lán)色字體），另新增了11個高度多態(tài)性位點(diǎn)（表1中黑色字體）。表1：STR分型位點(diǎn)TH01AMELTPOXD3S1358D12S391D5S818VWAD13S317D7S820D2S1338D8S1179D6S1043CSF1POD21S11D19S433D16S539FGAD18S51PENTADPENTAE

3.2實(shí)驗(yàn)流程實(shí)驗(yàn)流程簡圖如圖1圖1:實(shí)驗(yàn)流程圖3.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果3730測序儀檢測結(jié)果如圖2圖2:測序儀檢測結(jié)果圖4服務(wù)流程4.1標(biāo)準(zhǔn)服務(wù)流程1)客戶溝通，確認(rèn)檢測細(xì)胞樣本以及樣本數(shù)，提示實(shí)驗(yàn)可行性。2)建立實(shí)驗(yàn)方案，并在此過程中和客戶保持密切溝通。3)大規(guī)模實(shí)驗(yàn)，有嚴(yán)格的指控流程保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。4.2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)質(zhì)量控制流程1)所有分型信號要求信號清晰唯一，排除不確定信號干擾。2)設(shè)有陰性對照，質(zhì)控PCR污染數(shù)據(jù)。5服務(wù)優(yōu)勢：1)通用熒光引物，大幅降低3730實(shí)驗(yàn)成本。2)數(shù)據(jù)分析基于3730測序平臺，結(jié)果穩(wěn)定可靠。