品牌: cobioer
公司: 南京科佰生物科技有限公司
提供商: 科佰生物 服務(wù)名稱: 免疫沉淀
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免疫沉淀(IP):免疫沉淀是利用抗原抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后,再與Protein A/G或二抗偶聯(lián)的agaose或Sepharose beads孵育,通過離心得到beads-protein A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物,沉淀經(jīng)洗滌后,重懸于電泳上樣緩沖液,煮沸5-10 min,在高溫及還原劑的作用下,抗原與抗體解離,離心收集上清,上清中包括目的蛋白和少量的雜蛋白。
免疫沉淀實(shí)驗(yàn)用途非常廣泛,而且基于最基本的免疫沉淀實(shí)驗(yàn)衍生出了許多免疫沉淀相關(guān)實(shí)驗(yàn)手段(比如免疫共沉淀、染色質(zhì)免疫沉淀)。
IP實(shí)驗(yàn)對(duì)抗體質(zhì)量要求頗高,而且完備的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)是成功的基礎(chǔ),科佰生物有非常豐富的IP經(jīng)驗(yàn),會(huì)幫助客戶嚴(yán)格設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),提高成功率。
免疫沉淀:
原理:IP是利用抗原蛋白質(zhì)和抗體的特異性結(jié)合以及細(xì)菌蛋白質(zhì)的“proreinA"特異性地結(jié)合到免疫球蛋白的FC片段的現(xiàn)象活用開發(fā)出來的方法。目前多用精制的proreinA預(yù)先結(jié)合固化在argarose的beads上,使之與含有抗原的溶液及抗體反應(yīng)后,beads上的prorein A就能吸附抗原達(dá)到精制的目的。
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 細(xì)胞裂解;
2. 總蛋白定量;
3. 去除非特異性結(jié)合蛋白;
4. 加入抗體和Preotein A/G agarose beads孵育;
5. 洗脫。
6. WB檢測(cè)沉淀下來的目的蛋白(可選,更外收費(fèi))。
樣品要求:
1. 客戶需提供待檢測(cè)樣品、免疫沉淀用抗體(也可由我們代購);
2. 待檢測(cè)樣品可以是直接的待檢測(cè)蛋白樣品,也可以是細(xì)胞、組織或細(xì)菌樣品,但需收取蛋白抽提費(fèi)用。樣本收集后應(yīng)立即-20度保存,若長期保存應(yīng)-80度保存;
3. 免疫沉淀常盡量提供未經(jīng)凍存的新鮮蛋白樣品。免疫共沉淀:
原理:免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,Co-IP)是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。其原理是:當(dāng)細(xì)胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細(xì)胞內(nèi)存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來。如果用蛋白質(zhì)X的抗體免疫沉淀X,那么與X在體內(nèi)結(jié)合的蛋白質(zhì)Y也能沉淀下來。這種方法常用于測(cè)定兩種目標(biāo)蛋白質(zhì)是否在體內(nèi)結(jié)合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
實(shí)驗(yàn)流程:
1. 細(xì)胞裂解;
2. 總蛋白定量;
3. 去除非特異性結(jié)合蛋白;
4. 加入蛋白X的抗體和Preotein A/G agarose beads孵育;
5. 洗脫。
6. WB檢測(cè)蛋白Y。
樣品要求:
1. 客戶需提供待檢測(cè)樣品、免疫沉淀用抗體和WB檢測(cè)用抗體(抗體也可由我們代購);
2. 待檢測(cè)樣品可以是直接的待檢測(cè)蛋白樣品,也可以是細(xì)胞、組織或細(xì)菌樣品,但需收取蛋白抽提費(fèi)用。樣本收集后應(yīng)立即-20度保存,若長期保存應(yīng)-80度保存;
3. 免疫沉淀常盡量提供未經(jīng)凍存的新鮮蛋白樣品。
提交的產(chǎn)品和資料:
實(shí)驗(yàn)報(bào)告
訂購方法:1、詢價(jià)及訂購請(qǐng)?zhí)顚?quot;詢價(jià)單",并發(fā)送郵件至sales@cobioer.com2、根據(jù)客戶信息,我們會(huì)上門取樣品3、如需幫助,請(qǐng)發(fā)送郵件至tech@cobioer.com或撥打025-86880024,科佰生物的技術(shù)支持將竭誠為您服務(wù)。
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