主要功能用途
Applied Biosystems QuantStudio 7 Pro、QuantStudio 7 Flex實時熒光定量PCR儀借助于PCR反應(yīng)體系中加入的熒光基團,可實時監(jiān)測PCR全過程累積的熒光信號,通過熒光信號的分析對比分析,實現(xiàn)準確可靠地定性、相對定量和絕對定量分析。
主要應(yīng)用功能包括:
1、基因表達分析
動植物和微生物在生理病理、環(huán)境及外來脅迫下相關(guān)基因表達的變化分析以及SiRNA誘導(dǎo)基因沉默和基因敲除后特定基因表達水平的檢測。
2、miRNA表達水平的檢測
基于miRNA與特定靶基因mRNA表達水平變化間的關(guān)聯(lián),研究miRNA 調(diào)控基因表達機制。
3、基因分型(SNP genotyping,Genotyping)
利用TaqMan探針、飽和DNA染料HRM曲線分析進行基因分型,得出等位基因頻率、基因型占總基因型比率等。可應(yīng)用于如遺傳病診斷,SNP基因分型,藥物代謝酶DME基因分型,法醫(yī)遺傳學(xué)鑒定等。
4、拷貝數(shù)變異(CNV)
拷貝數(shù)變異(Copy number variation, CNV)是指因基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致長度1KB以上的基因片段的缺失(減少)、插入、重復(fù)(增加)、重排、倒 位、DNA 拷貝數(shù)目變化,也稱為拷貝數(shù)多態(tài)性(copy number polymorphisms, CNPs)。是造成物種個體差異和人類許多疾病(如癌癥、遺傳性疾病、心血管疾病)的一種重要遺傳基礎(chǔ)。熒光實時定量PCR檢測初始樣品的某個DNA 片段的拷貝數(shù)進行定量,用已知拷貝數(shù)為2的DNA內(nèi)參校正而實現(xiàn)對目DNA 片段拷貝數(shù)的確認。
5、高分辨率溶解曲線分析(High resolution melt, HRM)
DNA序列長度、GC 含量及堿基互補性差異影響DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。高分辨熔解曲線(high-resolution melt,HRM) 分析是通過實時監(jiān)測升溫過程中與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料釋放的綠色熒光強度的變化,了解PCR 產(chǎn)物中DNA分子的解鏈溫度情況,分析樣品特定基因片段DNA組成變化。實時熒光定量PCR實驗運行程序中引入溶解曲線分析環(huán)節(jié)后,可借助于專用HRM分析模塊完成HRM分析。HRM用于突變掃描和基因分型,不受突變堿基位點和種類限制,既可對未知突變進行篩查、掃描,又能對已知突變進行分析,還可用于STR分析。
6、病原體檢測(Pathogen detection)
實時熒光定量PCR儀能可靠用于臨床醫(yī)學(xué)人體上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病,以及畜牧業(yè)、農(nóng)作物病蟲害的病原體的檢測確認、感染嚴重程度的量化評估。
7、蛋白熱漂移分析(Protein thermal shift)
利用實時定量PCR儀來分析熱穩(wěn)定性,進行配體-蛋白結(jié)合的高通量篩選,突變或修飾對蛋白熱穩(wěn)定性的影響
使用蛋白結(jié)合染料(如Protein Thermal Shift 染料),實時定量PCR系統(tǒng)上運行實時熔解實驗,根據(jù)因蛋白熔解導(dǎo)致熒光圖像差異,分析配體與蛋白的結(jié)合穩(wěn)定性。可用于以高通量篩選配體與蛋白的結(jié)合, 篩選能與蛋白靶點結(jié)合的小分子和片段文庫候選藥物、抗體,鑒定最佳緩沖液條件以改善蛋白的純化和分離等。
8、食品安全和GMO(genetically modified organism)檢測
實時熒光定量PCR技術(shù)用于食品的微生物污染監(jiān)測、肉食類食品食材來源和組成的檢驗、如轉(zhuǎn)基因動植物基因的檢測等。
9、耐藥基因檢測等
性能特點
Applied Biosystems QuantStutio 7 Pro、QuantStudio 7 Flex實時熒光定量 PCR儀具有簡化易用的工作流程、直觀應(yīng)用軟件和大型觸摸屏界面。可以直接在觸摸屏上實施實驗參數(shù)設(shè)置、啟動和運行監(jiān)控和實驗數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)分析程序可將多個數(shù)據(jù)集整合在一處并以數(shù)據(jù)可視化形式呈現(xiàn)和分析。
1、樣品反應(yīng)模塊可互換
與QuantStutio 1/3/5只能運行單一樣品模塊不同,QuantStutio 7 Pro、QuantStudio 7 Flex可運行標準96×0.2 mL、快速96×0.1 mL、高通量384孔和TaqMan陣列卡(TAC)檢測模塊共4種反應(yīng)模塊。
TaqMan 陣列卡使用很少的樣品量,在10分鐘內(nèi)只需8個移液步驟即可加載多達384個靶標。
模塊更換極其簡便:只需按下按鈕或使用語音命令,即在96孔(0.1和0.2 mL)、384孔和 TaqMan 陣列卡間輕松切換。
2、多重?zé)晒舛糠治?/p>
QuantStudio 7 Pro、QuantStudio 7 Flex實時熒光定量PCR儀的OptiFlex光學(xué)檢測系統(tǒng),采用寬光譜、高強度白色LED光源,發(fā)射波長范圍寬,完美勝任最多6重實時熒光定量分析(Multiplex qPCR)應(yīng)用。
3、實驗數(shù)據(jù)規(guī)范化
QuantStudio 7 Pro、QuantStudio 7 Flex實行用戶賬戶管理控制,可建立標準化的實驗協(xié)議和調(diào)用實驗?zāi)0妫峁┓螹IQE指南要求的實時數(shù)據(jù)標記語言(Real-Time Data Mark-Up Language,RDML)導(dǎo)出功能。
與QuantStudio 7 Flex比, QuantStudio 7 Pro還具有以下4-6項新型功能。
4、VeriFlex多溫度梯度控制模塊
QuantStutio 7 Pro采用 VeriFlex溫控模塊,能在同一次運行中運行6種不同引物退火溫度,便于反應(yīng)條件的優(yōu)化(QuantStudio 7 Flex為普通等溫樣品模塊)。
5、智能操作功能
QuantStutio 7 Pro支持智能功能,可以通過面部認證和語音命令(如open Pro instrument, Change block等)免提操作,快速訪問個人實驗?zāi)0搴唾Y料。
智能幫助(Smart Help)允許用戶直接從觸摸屏直接聯(lián)系技術(shù)支持。由經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員根據(jù)用戶的偏好(電話或電子郵件)進行響應(yīng),提供支持。
6、遠程運行及云數(shù)據(jù)管理
借助于云平臺,QuantStutio 7 Pro可以直接從移動設(shè)備遠程設(shè)置實驗、控制儀器運行(QuantStudio 6 Flex只能通過電腦聯(lián)機接入云平臺)。
用戶不僅可隨時隨地訪問、存儲和在線數(shù)據(jù)共享。還可以基于web瀏覽器的分析模塊工具軟件,進行包括相對定量、標準曲線、高分辨率熔體(HRM)、基因分型和存在/缺失等在內(nèi)的多種qPCR分析。
7、FDA 21 CFR Part 11合規(guī)管理功能
儀器軟件內(nèi)含安全、審計、電子簽名套件,符合美國聯(lián)邦法規(guī)第21 章第11節(jié)法規(guī)(21 CFR Part 11) 的特定要求。可自動記錄系統(tǒng)上的所有操作,即對用戶登入、用戶專屬的默認程序設(shè)定、操作進行監(jiān)管并記錄,用戶僅能執(zhí)行特定功能,所有實驗流程都依管理者設(shè)定進行。
8、自動化兼容性
其他實驗室自動化系統(tǒng)集成,實現(xiàn)全天候自動板加載自動化,提高生產(chǎn)率并減少手動任務(wù)。
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