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Applied Biosystems 7500 Fast實時熒光定量PCR儀配置和IQ/OQ服務(wù)方案-

2023-04-02

主要功能用途

7500 Fast實時熒光定量PCR儀具有5色熒光檢測通道和96孔快速升降溫模塊。支持常規(guī)單重(Singleplex qPCR)、多重熒光定量分析(Multiplexing qPCR)和快速PCR檢測。

主要應(yīng)用包括:

1、基因表達分析

動植物和微生物在生理病理、環(huán)境及外來脅迫下相關(guān)基因表達的變化分析以及SiRNA誘導基因沉默和基因敲除后特定基因表達水平的檢測。

2、miRNA表達水平的檢測

基于miRNA與特定靶基因mRNA表達水平變化間的關(guān)聯(lián),研究miRNA 調(diào)控基因表達機制。

3、基因分型(SNP genotyping)

利用TaqMan探針、飽和DNA染料HRM曲線分析進行基因分型,得出等位基因頻率、基因型占總基因型比率等。可應(yīng)用于如遺傳病診斷,SNP基因分型,藥物代謝酶DME基因分型,法醫(yī)遺傳學鑒定等。

4、拷貝數(shù)變異(CNV)

拷貝數(shù)變異(Copy number variation, CNV)是指因基因組發(fā)生重排而導致長度1KB以上的基因片段的缺失(減少)、插入、重復(增加)、重排、倒 位、DNA 拷貝數(shù)目變化,也稱為拷貝數(shù)多態(tài)性(copy number polymorphisms, CNPs)。是造成物種個體差異和人類許多疾病(如癌癥、遺傳性疾病、心血管疾病)的一種重要遺傳基礎(chǔ)。熒光實時定量PCR檢測初始樣品的某個DNA 片段的拷貝數(shù)進行定量,用已知拷貝數(shù)為2的DNA內(nèi)參校正而實現(xiàn)對目DNA 片段拷貝數(shù)的確認。

5、高分辨率溶解曲線分析(High resolution melt, HRM)

DNA序列長度、GC 含量及堿基互補性差異影響DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。高分辨熔解曲線(high-resolution melt,HRM) 分析是通過實時監(jiān)測升溫過程中與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料釋放的綠色熒光強度的變化,了解PCR 產(chǎn)物中DNA分子的解鏈溫度情況,分析樣品特定基因片段DNA組成變化。實時熒光定量PCR實驗運行程序中引入溶解曲線分析環(huán)節(jié)后,可借助于專用HRM分析模塊完成HRM分析。HRM用于突變掃描和基因分型,不受突變堿基位點和種類限制,既可對未知突變進行篩查、掃描,又能對已知突變進行分析,還可用于STR分析。

6、病原體檢測(Pathogen detection)

實時熒光定量PCR儀能可靠用于臨床醫(yī)學人體上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病,以及畜牧業(yè)、農(nóng)作物病蟲害的病原體的檢測確認、感染嚴重程度的量化評估。

7、蛋白熱穩(wěn)定性分析(Protein thermal shift)

利用實時定量PCR儀來分析熱穩(wěn)定性,進行配體-蛋白結(jié)合的高通量篩選,突變或修飾對蛋白熱穩(wěn)定性的影響

使用蛋白結(jié)合染料(如Protein Thermal Shift 染料),實時定量PCR系統(tǒng)上運行實時熔解實驗,根據(jù)因蛋白熔解導致熒光圖像差異,分析配體與蛋白的結(jié)合穩(wěn)定性。可用于以高通量篩選配體與蛋白的結(jié)合, 篩選能與蛋白靶點結(jié)合的小分子和片段文庫候選藥物、抗體,鑒定最佳緩沖液條件以改善蛋白的純化和分離等。

8、食品安全和GMO(genetically modified organism)檢測

實時熒光定量PCR技術(shù)用于食品的微生物污染監(jiān)測、肉食類食品食材來源和組成的檢驗、如轉(zhuǎn)基因動植物基因的檢測等。

9、耐藥基因檢測

性能特點

7500 Fast實時熒光定量PCR儀采用的快速加熱塊,可在極速運行時保證熱均一性。快速變溫循環(huán)方式,可在短短30分鐘內(nèi)得到高質(zhì)量實驗結(jié)果;

1、5色熒光檢測通道完美支持多重實時定量分析

7500 Fast系統(tǒng)配置有熒光激發(fā)濾片、檢測濾片優(yōu)化固定組合的5個熒光檢測通道,經(jīng)出廠校準的染料包括:FAM/SYBR Green I、VIC/JOE、NED/ TAMRA/Cy3、ROX/Texas Red 和 Cy5 染料,能夠在單個反應(yīng)孔中同時進行多個靶標的同步檢測。

2、支持快速反應(yīng)檢測

7500 Fast實時熒光定量PCR儀使用獨特設(shè)計的熱循環(huán)模塊,可在極速運行時保證反應(yīng)模塊溫度的均一性。

配合TaqMan Fast Universal PCR Master Mix和Fast SYBGreen Master Mix預(yù)混液和快速光學反應(yīng)板,在不影響擴增延伸階段時間和實驗擴增效能情況下,快速變溫速率完成規(guī)定實驗程序。快速光學反應(yīng)板可確保在 10–30 uL 反應(yīng)體積下獲得與標準常量實時熒光定量PCR反應(yīng)一致的檢測精度,而更快速得到實驗結(jié)果。

快速熱循環(huán)技術(shù),最短可在30分鐘內(nèi)完成一次運行。

3、高分辨率熔解曲線分析。

Applied Biosystems熔解曲線分析軟件(High Resolution Melting Analysis,HRM)軟件,易于使用,可通過HRM分析實現(xiàn)更精確的突變篩查和基因分型分析。

4、21 CFR Part 11合規(guī)管理功能

21 CFR Part 11合規(guī)管理軟件,內(nèi)含安全、審計、電子簽名套件,實現(xiàn)運行和數(shù)據(jù)的合規(guī),可滿足實驗管理符合美國聯(lián)邦法規(guī)第21章第11節(jié) (21 CFR Part 11)的規(guī)定。

5、AB提供IQ/OQ/IPV驗證支持解決方案

經(jīng)驗證的AB工程師可幫助執(zhí)行Installation Qualification(IQ)/Operational Qualification(OQ)和Iinstrument Performance Verification(IPV)流程操作。

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